本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统,从样品中分离纯化高质量质粒DNA,特殊包被的磁珠,在一定条件下对目的DNA具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的DNA,能够达到快速分离纯化DNA 的目的。整个过程不涉及有毒试剂,安全、便捷、提取的DNA 纯度高。使用本试剂盒纯化的基因组DNA (OD260-OD320)/(OD280-OD320)均在1.7~2.0之间,可以应用到各类下游分子生物学实验。
适用范围
适用于各种质粒DNA 的提取,适用于自动化核酸提取平台。
注意事项
1. 菌种过夜培养OD 值需达到0.1 以上。
2. 磁珠用前一定要充分混匀。
3. 取过夜培养的菌液离心后,尽量吸干净上清,否则可能影响质粒纯度。
4. 整个裂解过程操作尽量温和,并在要求时间内完成。
5. 如果菌液浓度较高,则建议磁珠量可适当增加,以获取高浓度质粒。
操作方法
1.裂解
取1-2ml(低拷贝质粒可取2-5ml)过夜培养的菌液至1.5mlEP 管中,12,000rpm 离心1min,尽量吸净上清,加入100μl Buffer A(高拷贝可用50ul),振荡重悬菌体,保证无菌块存在。加入100μl Buffer B 温和颠倒混匀6~9 次,至溶液清澈可见,时间3min。加入75μl Buffer C 立即温和颠倒混匀6~9 次,溶液出现絮状沉淀,静置冰上2min 以充分中和。12,000rpm 离心10min。
2.结合
取上清于新的1.5mlEP 管中,加入振荡混匀的磁珠5μl,异丙醇250μl(自备),颠倒混匀5min。将EP 管置于磁力架上进行磁分离,吸弃废液(吸净管盖及管底残液)。
3.洗涤
加入500μl 洗涤液,轻柔混匀1-2min,然后磁分离,吸净管盖及管底的残液;
4.洗脱
室温晾干5min,加入100μl 洗脱液,缓慢抽吸混匀,65℃温浴10min。每隔2~3min 轻摇EP 管几下混匀。然后磁分离,小心吸取上清液至新的EP 管中,进行下游实验。