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TALEN靶向敲除技术
TALEN(transcription activator-like (TAL) effector nuclease)技术是基于对DNA识别的TALEN臂和人工改造的核酸内切酶的切割域(Fok I)的结合对细胞基因组进行修饰而实现的。TAL的核酸识别单位由34个氨基酸组成,其与DNA序列结合的特异性取决于第12位和第13位氨基酸残基(重复可变的双联氨基酸位点,RVDs)。RVDs和A、T、C、G就恒定的对应关系,即NI识别A、NG识别T、NN识别G、HD识别C。因此,要识别特定的核酸序列,只需将TAL识别模块按照对应的核苷酸序列串联组装即可,通常会在目的基因中选择两处相邻(间隔15-20个碱基)的靶序列(长度为16-20bp的DNA序列)分别进行TALE识别模块的构建。通过DNA识别域结合到靶位点上,以及FokI的切割域形成二聚体后,可特异性对目标基因DNA实现切断。在非同源末端连接修复过程中,DNA双链断开后会由于碱基的随机增减造成目标基因功能缺失。该技术目前已成功应用于植物、细胞、酵母、斑马鱼及大、小鼠等各类模式动物的研究领域。
1、设计、构建TALEN质粒
2、TALEN质粒体外转录成mRNA
3、mRNA原核显微注射(F0小鼠生产)
4、F1小鼠生产
1、无基因序列、细胞、物种限制,几乎可敲除任意基因。
2、实验设计简单准确、成本低。
3、毒性低、脱靶情况少;成功率几乎可达100%。
4、TAL的核酸识别单元与A、G、C、T有恒定的对应关系。
5、可识别任意目标基因序列,且不受上下游序列影响。
6、服务周期:3-4周。
7、若另有疑问欢迎致电本公司咨询,我们将竭诚为您服务。
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