质粒小量快速提取试剂盒
产品简介 本公司生产的质粒小量提取试剂盒通常应用于分子生物学实验，具有省时、实用并可同时提取多个质粒样本的特点。
本质粒提取系统摒弃了很多传统方法所带来的诸多不便。该试剂盒可用于提取任何质粒，但实验证明在质粒小于20kb的时候效率最高。当使用标准提取方法时，整个提取过程可在30分钟内完成并且避免了有机溶剂抽提和乙醇沉淀步骤，质粒最大得率可达30ug。提取的质粒不需经过其它的处理就可以用于自动荧光DNA测序、限制性内切酶消化、体外转录等实验。
试剂盒组成| 产品编号 | 包装规格 50次 | 包装规格 100次 | 保存条件 |
| Solution I | 15ml | 30ml | 4°C |
| Solution II | 15ml | 30ml | 室温 |
| Solution III | 20ml | 40ml | 室温 |
| 漂洗液 | 20ml | 2´20ml | 室温 |
| 洗脱液 | 10ml | 20ml | 室温 |
| 吸附柱 | 50个 | 100个 | 室温 |
| RNase A | 150ul | 300ul | -20°C |
| 说明书 | 1 份 | 1 份 | |
温馨提示 1、使用前Solution I请加入指定体积的RNase A，每次实验结束后，4°C保存。
2、第一次使用前应在漂洗液中加入35ml无水乙醇。
3、温度低时，Solution II可能会出现结晶，请在水浴锅中融化后使用。
4、当提取松弛型质粒时，菌液收集量不要超过5ml，如果超过5ml菌液，质粒的总量会超过DNA结合柱的结合能力，质粒的产量也不会得到提高。当提取严谨型质粒时，通常使用5~10ml菌液。
操作步骤 1、收集菌液1.0~5.0ml，12000rpm离心1分钟，彻底去除上清。
2、加入250ul Solution I，充分混匀细胞。细菌悬浮一定要彻底，否则抽提质粒DNA效率会大大降低。
3、加入250ul Solution II，立即轻柔颠倒离心管4次，使细菌裂解至澄清，时间最好不要超过5分钟。
4、加入350ul Solution III，立即温和颠倒离心管4次，12000rpm离心10分钟。
5、将上清加入吸附柱中，室温放置2分钟，12000rpm离心30秒，弃废液。
6、加入600ul漂洗液于吸附柱中，12000rpm离心30秒，弃废液。
7、重复步骤6一次，再以12000rpm离心1分钟。
8、取出吸附柱，放入一个干净的1.5ml离心管中，加入30ul~100ul的洗脱液，室温放置2~5分钟，12000rpm离心1分钟。
常见问题分析| 问题 | 可能原因 | 解决方法 |
| 没有提取到质粒 | 使用了EndA+菌株，在含有Mg2+的溶液中被降解 | 1、在加DNA漂洗溶液之前用1ml40%异丙醇/4.2M盐酸胍溶液清洗DNA结合柱
2、避免使用丰富培养基如SOB等 |
| 细胞裂解差 | 菌液中细菌浓度太高 | 使用LB培养基 |
| 细菌沉淀重悬不彻底 | 使用涡旋器或用枪头吹打，不能有可见的大块细菌沉淀 |
| DNA在上样电泳时溢出点样孔 | DNA结合柱中酒精没有除干净 | 增加步骤7的离心时间，如果DNA已经洗脱出来，可以用酒精沉淀DNA并风干，然后水溶 |
| 质粒产量低 | 摇细菌时间太长，造成空菌生长过量 | 确认是否所有的培养基都加了抗生素，不要培养细菌超过24h（固体/液体培养基），一般12~16h已足够 |
| 细菌太老，活力不够 | 划线培养细菌使之活化 |
| 质粒为严谨型 | 使用5~10ml菌液，但是不要超过10ml菌液 |
| 在DNA结合溶液中已经形成沉淀 | 将DNA结合溶液加热到37℃均匀，冷却到30℃备用 |
| DNA结合柱太干 | 步骤7之后立即用洗脱液洗脱 |
| 用错试剂 | 请仔细核对试剂名称 |
| 用自动荧光测序没有结果 | 测序反应体系中DNA的量加的不够 | 提取的质粒要经过琼脂糖凝胶电泳定量。要使用新鲜的LB培养基和新活化的菌株摇菌 |
| 使用TE洗脱 | 最好使用洗脱液洗脱（TE中的EDTA能降低测序反应中的Mg2+有效浓度） |
| 杂质多 | 重复步骤6 |
| 质粒酶切效果不好 | 内切酶浓度和酶切时间需要优化 | 尽量使用内切酶的最佳酶切缓冲液；内切酶浓度不要超过总体积的1/10，酶切时间不要超过3h |
| 使用TE洗脱液 | 尽量使用试剂盒洗脱液洗脱 |
| 使用EndA+菌株导致DNA在酶切时降解 | 在步骤5后用1ml40%异丙醇/4.2M盐酸胍溶液清洗DNA结合柱
|
| 基因组DNA污染 | 加Solution II后使用涡旋器或剧烈振荡 | 加Solution II不要剧烈振荡 |
| 紫外测定DNA浓度低于琼脂糖凝胶测定 | 微量的污染物同时被洗脱出来，会影响紫外分光光度计读数 | 用酚/氯仿，乙醇沉淀，70%酒精清洗后干燥、水溶，重新紫外定量 |
EndA-和EndA+菌株表| EndA- EndA+ |
| BJ5183 BL21（DE3） |
| DH1 CJ236 |
| DH20 HB101 |
| DH21 JM83 |
| DH5a JM101 |
| JM103 JM110 |
| JM105 LE392 |
| JM106 MC1061 |
| JM107 NM522(all NM series strains are EndA+) |
| JM108 NM544 |
| JM109 P2392 |
| NM294 PR700(all PR series strains are EndA+) |
| Select96 Q358 |
| SK1590 RR1 |
| SK1592 TB1 |
| SK2267 TG1 |
| SRB Y1088（all Y10 series strains are EndA+） |
| TOP10 BMH71-18 |
| XL1-Blue ES1301 |
| XLO |
