基因组DNA快速提取试剂盒

● 裂解液MS中含变性剂，请不要直接接触皮肤。

● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，

即含75%乙醇。

产品说明

本产品可用于昆虫、线虫、动物等样本的基因组DNA纯化。纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA，由硅胶膜柱可逆吸附体系中的基因组DNA，经蛋白酶K消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质，用纯化液洗脱获得基因组DNA。一次可从不超过10 mg组织材料中提取到3-35 μg的高纯度基因组DNA（OD₂₆₀/OD₂₈₀=1.7-1.9），此基因组DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验。

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷贝基因的PCR扩增鉴定。

保存条件

蛋白酶K室温运输，于-20℃保存，避免反复冻融。

其余试剂置于室温（15-25℃）干燥条件下保存1年。

如果消化缓冲液DS和MS中有沉淀，可在55℃加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。

注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

● 漂洗液PE第一次使用前请按瓶上标签加入3倍体积的无水乙醇，即15 ml漂洗液PE加入45 ml无水乙醇，30 ml漂洗液PE加入90 ml无水乙醇，使用后立即盖紧盖子。

● 消化缓冲液DS和裂解液MS室温保存可能会有沉淀产生，在55℃加热溶解，待恢复至室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。

● 应尽量使用新鲜的实验材料，确保提取的基因组DNA不被降解。不能立刻提取基因组DNA 的实验材料应尽快置于液氮或-80℃冰箱中保存并避免反复冻融。

● 使用液氮研磨组织材料时，应随时加入液氮，确保提取的基因组DNA不被降解。

● 基因组DNA需长期保存时，建议使用纯化液TE。用无菌的离心管分装后保存于-20℃或-80℃。

● 所有离心步骤均为室温下进行。

● 请严格按照操作步骤操作。

操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

1 取少量样本材料，放入液氮预冷的研钵中。快速用力研磨的同时加入少量液氮，直至样本材料被研磨成粉末。将研磨好的样本转移至1.5 ml离心管中，每管组织材料含量应不超过10 mg。

● 如没有液氮，可用剪刀剪成小块，放入研钵或匀浆器中，加入适量TE（pH 8.0），处理成细胞悬液。将不超过10 mg当量的细胞悬液转移至一个新的1.5 ml的离心管中，12,000 rpm离心1min，弃上清，收集沉淀。

● 每只离心管中的样本当量不宜超过10 mg。每10 mg样本材料可获得10 μg基因组DNA。样本量过大，将会影响细胞核裂解效率并可能堵塞纯化柱，进而降低基因组DNA的得率与纯度。

2 加入200 μl消化缓冲液DS，涡旋振荡至形成完全均一的悬浮液。

● 如需去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml，N9042），振荡15秒，室温放置5min。

3 加入20 μl蛋白酶K，混匀，55℃水浴或金属浴，至组织完全溶解，通常需要1-3小时。对特别难溶解的组织如尾巴、昆虫可放置过夜。

4 加入220 μl裂解液MS，涡旋振荡混匀。65℃温浴10min。溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠，室温放置5min使溶液冷却。

● 加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀，一般65℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。

5 加入220 μl无水乙醇，上下颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀。简短离心以去除管盖内壁的水珠。将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

● 若溶液体积大于纯化柱容积（700 μl），可分两次离心。

● 此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

6 加入500 μl去蛋白液PS，12,000 rpm离心1min，弃滤液。

● 此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质，以获得高质量基因组DNA。

7 加入500μl漂洗液PE，12,000 rpm离心1min，弃滤液。

● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。

8 加入500 μl漂洗液PE，12,000 rpm离心1min，弃滤液。

9 12,000 rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中残留的液体。

● 此步骤的作用是去除残留乙醇，避免影响后续的酶促反应（PCR或酶切）。同时利于基因组DNA充分溶解。

10 将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处，悬空滴加30-100μl洗脱液TE。室温放置2min。

11 12,000 rpm离心2min，管底即为高纯度基因组DNA。-20℃保存。

● 洗脱液TE可用去离子水代替，但其pH需为8.0-8.5。

● 对洗脱液TE 65℃预热，会提高基因组DNA的产量。