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随机引物法DNA探针标记试剂盒

价格：￥1

品牌：xuanya

产地：中国/美国

最新更新日期：2021-08-17 10:23

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上海烜雅生物科技有限公司

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产品属性

保存条件

常温运输和保存

保质期

两年

英文名	Random Primer DNA Labeling Kit

数量

890

供应商	上海烜雅生物科技有限公司

规格

5次

产品说明

随机引物法DNA探针标记试剂盒产品及特点：
本产品是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒，标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在KlenowDNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成，可用下面的示意图表示：

随机引物法DNA探针标记试剂盒本产品对Feinberg和Vogelstein经典方法进行了改良，具有下列特点：
1.提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分，简化了反应加样步骤，提高了标记反应的可重复性。
2.使用无外切活性的Klenowexo-DNA聚合酶，已标记DNA探针不会被酶降解。
3.快速，最快1小时即可完成标记反应。
4.得到的DNA探针比活性高（如果是同位素，可以达到109cpm/ugDNA）。
5.所需模版DNA量少，可以是各种形状（线状和环状）的、也可以是单链或双链的，但长度必须在100bp以上。
6.得到的探针长度在200-400nt之间，可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7.提供三种标记选择，其中A可用于各种同位素和非同位素标记，但需自备标记底物；B和C可分别用于生物素和标记，不需自备标记底物。

随机引物法DNA探针标记试剂盒运输及保存：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：0.5MEDTA（pH8.0）。如果是A型，则需要自备标记的核苷酸。

随机引物法DNA探针标记试剂盒使用方法
1.在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分：
成分用量
模板DNA 50-150ng
2×随机引物标记反应液(ABC三种之一) 10uL
超纯水补水到15uL
随机引物法DNA探针标记试剂盒注意：非同位素标记基团疏水性强，易与塑料离心管表面非特异性结合，所以要硅化塑料离心管。模板DNA并非越多越好，否则会竞争性地抑制探针跟靶分子的杂交。
2.沸水浴5-10分钟，或在PCR仪上100℃加热5-10分钟后立即放冰上待用。
3.高速离心数秒使所有液体集中在管底，根据试剂盒类型加入下列成份：
试剂盒类型成分及用量
A型 dATP、dGTP、dCTP各1uL（共3uL，浓度均为2mM）自备的2mMdTTP/标记dUTP混合物（见注）1uL 1uLKlenowexo聚合酶
B型 1uLKlenowexo聚合酶 4uL超纯水不需加dNTP，已经包括在2×随机引物标记反应液（B型）中
C型 1uLKlenowexo聚合酶 4uL超纯水不需加dNTP，已经包括在2×随机引物标记反应液（C型）中
随机引物法DNA探针标记试剂盒注：上表中的dTTP/标记dUTP混合物中dTTP和标记的dUTP的总浓度为2mM，dTTP与标记dUTP的比例在65：35为最佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl标记的dUTP，则用户需要自己摸索其与dTTP之间的最佳比例，如果使用32P标记的dUTP，则比活最好为3000Ci/mmol，浓度为好为10uCi/uL，并且不需要加入dTTP。
4.轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
5.37℃保温1-20小时。标记效率跟模板量和保温时间相关，具体见下表：

6.加1uL自备的0.5MEDTA（pH8.0）终止反应，加热100℃5分钟使DNA探针变性成单链，然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测，标记产物将是弥散状态。立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要
随机引物法DNA探针标记试剂盒注意：本方法标记核苷酸掺入率极高，因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化，注意不要用酚抽提法纯化非同位素标记的DNA探针，因为这些标记分子疏水性强，能使标记的DNA进入疏水的有机相而丢失，但可以用乙醇沉淀和SephadexG50回收（可另购柱式探针纯化试剂盒）。对比活高的同位素标记探针，由于同位素其极其不稳定，因此应该立即使用，不要长久放置。

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基本溶液

玻璃匀浆器 ,1mL

玻璃匀浆器 ,2mL

玻璃匀浆器 ,5mL

玻璃匀浆器 ,10mL

Earle 溶液

Hanks 溶液

D-Hanks 溶液

PBS 缓冲液 ,10×

杜氏 PBS 缓冲液 ,10×

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