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组织基因组DNA小量提取试剂盒

价格：￥390

品牌：简石生物

产地：北京

最新更新日期：2021-08-17 11:34

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北京天漠科技开发有限公司

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公司：北京天漠科技开发有限公司

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产品属性

保存条件

常温

保质期

1年

英文名	TIANMO BIOTECH

供应商

简石科技

规格

50次

产品说明

操作手册

组织基因组DNA小量提取试剂盒

Catalog No. TD325-50 (50次反应)
TD325-200 (200次反应)

Highlights

可从固体组织，血液，细胞，FFPE，头发等来源的样品中提取到高纯度的基因组DNA。
结合使用蛋白酶K消化步骤。
获得的基因组DNA产量高、纯度好，可以直接用于酶切、PCR、高通量测序等分子生物学实验。

产品组成:

试剂盒组成	保存	50次	200次
蛋白酶K及保存液	-20℃	2x5mg	2x20mg
2X消化液	室温	5 ml	20 ml
基因组DNA裂解液	室温	50 ml	2X100 ml
基因组DNA洗涤液1	室温	15 ml	50 ml
基因组DNA洗涤液2	室温	50 ml	100 ml
基因组DNA洗脱液 2号柱	室温	10 ml	20 ml
基因组DNA洗脱液 2号柱	室温	50个	200个
收集管（2ml）	室温	100个	400个

Note –售出后一年内产品质量是可以保证。试剂已经过大量的常规检测来保证其可操作性。此产品仅供研究并且需要由专业人员来使用。
试剂盒中的部分试剂是有刺激性的。请带好手套和防护眼镜。

注意事项:

环境温度低时基因组2X消化液或者基因组DNA洗涤液1可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
蛋白酶K及其保存液可常温运输。使用前需要添加260µl保存液到TD350里的蛋白酶K 里，添加1040µl保存液到TD351里的蛋白酶K 里。
避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
推荐：添加β巯基乙醇到基因组DNA裂解液中，终浓度为0.5% 例如，250µl添加到50mlDNA裂解液，500µl添加到100mlDNA裂解液里。

特性:

样品种类: 固体组织，全血，细胞，FFPE,毛发等样品。获得的基因组DNA产量高、纯度好，可以直接用PCR等各种分子生物学实验。

Abs260/280≥ 1.8 。

基因组DNA大小: 一般可回收到100bp-40 kb大小左右的基因组DNA。如果样品中存在线粒体DNA，病毒DNA等也会一起提取到。
DNA 纯度: 获得的基因组DNA产量高、纯度好，可以直接用PCR等各种分子生物学实验。

Abs260/280≥ 1.8 。

基因组DNA回收情况: 50µl 的洗脱液或水可从每mg的心脏，脑组织中提取到1-3µg DNA。每mg的肝，肾，肺组织中提取到3-5 µg DNA。100µl人全血中回收到3µg以上的基因组DNA。
需要的仪器设备: 水浴锅或者金属浴（55℃）。微型离心机，涡旋仪。

试剂制备:

1．使用前需要添加260µl保存液到TD350里的蛋白酶K 里，添加1040µl保存液到TD351里的蛋白酶K 里。蛋白酶K的终浓度约为20mg/ml
2．添加β巯基乙醇到基因组DNA裂解液中，终浓度为0.5% 例如，250µl添加到50mlDNA裂解液，500µl添加到100mlDNA裂解液里。

操作步骤:

固体组织
以下步骤是针对从25mg新鲜或者冻存的组织中提取到DNA设计的。一般产量是：每毫克的骨骼，心脏和脑组织中可以提取到1-3微克的DNA。每毫克肝，肾，肺等组织可以提取到3-5微克的组织。对于毛发和FFPE样品参照附录的操作步骤

对于固体组织（≤25mg）按照以下溶液配比添加到一个离心管中。

H₂O 95µl
2X消化液95µl
配好的蛋白酶K 10µl

混匀并且在55℃孵育1-3个小时。（如果有必要可以进行过夜消化，过夜消化并不会增加产量和影响DNA的完整性）
添加700µl基因组DNA裂解液到上述离心管中混匀，并在涡旋仪上振荡，在10,000 x g下离心1分钟分离不溶的沉淀。
将上清转移至2号柱中，2号柱套在一个收集管里，在10,000 x g下离心1分钟。
将2号柱套在一个新的收集管里。
添加200μl的基因组DNA洗涤液1到2号柱中，在10,000 x g下离心1分钟。

无需倒掉收集管中的废液，即可直接进行下一步。

添加400μl的基因组DNA洗涤液2到2号柱中，在10,000 x g下离心1分钟。
将2号柱移至干净的1.5ml离心管中直接添加≥ 50μl的基因组DNA洗脱液到柱基质上（洗脱液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好，如果是25mg的组织可以添加200μl），室温下放置2-5分钟，10,000 x g 离心30秒来洗脱基因组DNA。

全血，生物体液等样品
以下步骤是针对从100µl全血中提取基因组DNA而设计的。血液样品可以是新鲜的或者冻存的，兼容EDTA,柠檬酸，肝素等抗凝剂。也可以提取其他生物体液或小于5x10⁶的细胞悬液。

对于100µl全血，如果不足100µl则用水补齐。按照以下溶液配比添加到一个离心管中。

2X消化液95µl
配好的蛋白酶K 5µl

混匀并且在55℃孵育20分钟。
添加700µl基因组DNA裂解液到上述离心管中混匀，并在涡旋仪上振荡。
将上述混合物转移至2号柱中，2号柱套在一个收集管里，在10,000 x g下离心1分钟。
将2号柱套在一个新的收集管里。
添加200μl的基因组DNA洗涤液1到2号柱中，在10,000 x g下离心1分钟。

无需倒掉收集管中的废液，即可直接进行下一步。

添加400μl的基因组DNA洗涤液2到2号柱中，在10,000 x g下离心1分钟。
将2号柱移至干净的1.5ml离心管中直接添加≥ 50μl的基因组DNA洗脱液到柱基质上（洗脱液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好，一般选择100-200μl），室温下放置2-5分钟，10,000 x g 离心30秒来洗脱基因组DNA。

单细胞层
以下步骤是针对从5x10⁶以内的细胞单层而设计的。虽然细胞类型和培养环境不同，但此操作步骤兼容高密度和低密度的生长细胞。

用胰蛋白酶消化或者从培养板等容器中刮下贴壁细胞。在500 x g下离心5分钟细胞悬液，去除上清液，用1ml

的PBS重悬细胞沉淀并将细胞悬液移至一个离心管中。在500 x g下离心5分钟细胞悬液。去除上清液，用以下配比溶液重悬细胞沉淀。

H₂O 95µl
2X消化液95µl
配好的蛋白酶K 5µl

混匀并且在55℃孵育20分钟。
添加700µl基因组DNA裂解液到上述离心管中混匀，并在涡旋仪上振荡。在10,000 x g下离心1分钟分离不溶解的细胞沉淀。
将上一步的上清转移至2号柱中，2号柱套在一个收集管里，在10,000 x g下离心1分钟。
将2号柱套在一个新的收集管里。
添加200μl的基因组DNA洗涤液1到2号柱中，在10,000 x g下离心1分钟。

无需倒掉收集管中的废液，即可直接进行下一步。

添加400μl的基因组DNA洗涤液2到2号柱中，在10,000 x g下离心1分钟。
将2号柱移至干净的1.5ml离心管中直接添加≥ 50μl的基因组DNA洗脱液到柱基质上（洗脱液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好，一般选择200μl如果细胞数达到5x10⁶），室温下放置2-5分钟，10,000 x g 离心30秒来洗脱基因组DNA。

以下表格为细胞量的参考，实际情况会根据不同的细胞类型而不同

培养容器	孔或瓶的表面积	细胞数
96孔培养板	0.32-0.6 cm²	4-5x10⁴
24孔培养板	2 cm²	1-3x10⁵
12孔培养板	4 cm²	4-5x10⁵
6孔培养板	9.5 cm²	0.5-1x10⁶
T25培养瓶	25 cm²	2-3x10⁶
T75培养瓶	75 cm²	0.6-1x10⁷
T175培养瓶	175 cm²	2-3x10⁷

参考附录:
头发，毛发等相关样品
需要用到新鲜制备的DTT(未提供)进行溶液的配置，替换针对固体组织操作步骤中的第一步，配置比例如下
H₂O 90µl
2X消化液90µl
DTT(1M) 10µl
配好的蛋白酶K 10µl
之后的操作步骤同固体组织操作。

石蜡包埋组织（FFPE）样品
在采用固体组织操作步骤之前组织首先需要脱蜡。脱蜡步骤如下

1. 尽可能多的去除（切掉）石蜡部分。
2. 将样品移至1.5ml离心管中，添加750µl的二甲苯（未提供）。
3. 短暂涡旋振荡后在室温下放置1小时，期间可使用摇床轻摇。
4. 在10,000 x g下离心1分钟，从样品中去除二甲苯。
重复2-4步

针对步骤5-8，每一步的步骤都是添加洗涤液，短暂涡旋，在摇床上轻摇孵育5分钟，然后在10,000 x g下离心1分钟，去除洗涤液。

5. 用1ml（100%）乙醇洗涤2次。
6. 用1ml（95%）乙醇洗涤2次。
7. 用1ml（75%）乙醇洗涤2次。
8. 用1ml双蒸水洗涤1次。
9. 从样品中去除尽可能多的双蒸水。
10. 使用样品进行提取或保存在-80℃

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