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酵母基因组提取试剂盒

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上海烜雅
国产/进口
2021-08-17 11:54
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上海烜雅生物科技有限公司

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上海烜雅生物科技有限公司
黄经理
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1517347860
产品属性
数量100
保质期一年
供应商上海烜雅生物科技有限公司
保存条件-20℃，避免反复冻融
规格50T
产品说明
酵母基因组提取试剂盒使用说明
细菌基因组DNA提取试剂盒使用方法如下：
操作步骤：
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、取细菌培养液1ml，12000rpm离心1min.，尽量吸除上清。
2、向菌体中加入200ul溶液A，振荡或用移液器吹打使菌体充分悬浮（如果是革兰氏阳性菌，可在此步骤加入终浓度为20mg/ml的溶菌酶），向悬浮液中加入20ul的RNase A (10mg/ml)，充分颠倒混匀，室温放置15-30min。
3、向管中加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml)，充分混匀，55℃消化30-60min，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止，此时可见菌液呈清亮粘稠状。
4、向管中加入200ul溶液B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可于75℃放置15-30min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如果溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能会导致DNA的提取量以及纯度降低，还可能堵塞吸附柱。
5、向管中加入200ul无水乙醇，充分混匀，此时还可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入到吸附柱中，静置2min。
6、12000rpm离心2min. 弃废液，将吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)。12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
8、向吸附柱中加入600ul漂洗液， 12000rpm离心l min， 弃废液，将吸附柱放入收集管中。
9、12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR等。
10、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心1min。
11、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2min ，12000rpm离心2 min，即可得到高质量的细菌基因组DNA。
注意事项:
1、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2、若试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响提取效果。
3、如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况，可适当延长离心时间。
4、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)， pH值低于7. 0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
5、 DNA浓度及纯度检测：得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。 回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1.0相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。OD260/0D280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
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