哺乳动物稳定转染细胞系构建

特点
→ 技术平台：细胞转染；抗生素筛选
→ 筛选后可以得到稳定表达外源基因的细胞克隆：质粒DNA整合到染色体上

原理
通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术，将靶基因导入细胞48小时后，靶基因即在细胞内表达。根据不同的实验目的，可进行靶基因表达的检测等实验(即瞬时转染)。如若建立稳定的细胞系，则可对靶细胞进行筛选，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的杀稻瘟菌素(Blasticidin)，新霉素(neomycin，G418)药物，最常用的真核表达基因载体的筛选抗性有潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin)。筛选后可以得到稳定表达外源基因的细胞克隆，这就是稳定转染。稳定转染的质粒DNA整合到染色体上，使得转染的细胞可长期表达。

服务流程
1) 筛选浓度测定：以前一天天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度。
2) 细胞接种：转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长特性而定。进行转染当天细胞应达到80%覆盖。
3) 细胞转染
4) 抗生素筛选
5) 鉴定筛选结果

客户提供
→ 构建好的外源基因载体
→ 待转染的细胞系(1*106个细胞，可传代，倍增时间小于48小时)
→ 关于细胞培养条件的说明
我们提供
构建好的稳定细胞系及相关的外源基因表达分析

质量保证
可对转染细胞的外源基因表达进行严格鉴定，包括RNA水平和蛋白水平

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