| 服务名称 | 真核蛋白表达与纯化服务 |
真核蛋白表达与纯化服务
由于应用于该领域的重组蛋白基本上均需要翻译后修饰，以获得与天然分子相同的生物活性，而真核细胞自身具备蛋白折叠和翻译后修饰的功能，因此很多客户选择真核蛋白表达系统，表达高质量的重组蛋白。
毕赤酵母（P. pastoris）系统表达与纯化服务 | |||
| 主要步骤 | 内容 | 交付内容 | 交付时间 |
| 目标基因 全基因合成 | 1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列； 2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子的优化； 3. 合成设计好的基因序列。 | 目的基因（在T载体或常规穿梭载体上）及测序报告 | 2kb 以下，2周左右 |
| 目标基因 亚克隆 | 1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒； 2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上； 3. 测序验证构建质粒的准确性； 4. 可提供表达载体（Ppic 9K系列为主）。 | 正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告 | 有模板：2-3周 无模板：4周 |
| 毕赤酵母表达菌株电转化和筛选 | 1. 酶切线性化表达质粒； 2. 将表达质粒通过电转化到高效的毕赤酵母表达菌株中； 3. 通过PCR鉴定至少挑选5个阳性克隆； 4. 进行高拷贝菌株筛选； 5.可提供表达菌株：X33、GS115、SMD1168。 | PCR阳性克隆和PCR结果报告以及高拷贝筛选报告 | 2-4周 |
| 毕赤酵母表达菌株筛选 | 1. 将5个阳性克隆于BMGY培养基中扩增，然后换至BMMY培养基中，并加入甲醇诱导表达目标蛋白； 2. SDS-PAGE电泳检测培养上清中目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达； 3. 如果培养上清中检测不到表达，则通过将上清浓缩20倍作用再检测，或通过Western-blot方法检测目标蛋白表达（客户需要提供相关抗体）。 | 阳性克隆菌株及表达筛选结果报告 | 2周 （不含western blot时间） |
| 毕赤酵母表达菌株表达优化 | 1. 挑选20个阳性克隆进行常规表达筛选，并对其中表达最好菌株优化表达条件； 2. 对挑选出来的单克隆菌株，优化培养及诱导条件（培养基、菌体密度、甲醇浓度、诱导时间等），提高目标蛋白的表达量。 | 三个阳性克隆菌株及优化表达条件结果报告 | 2周 |
| 目标蛋白 表达及纯化 | 1. 摇瓶培养1L重组酵母菌，诱导表达目标蛋白； 2. 通过亲和、离子交换、疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白； 3. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量； 4. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。 | 纯化好的目标蛋白1mg以上及纯化报告，可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的最终蛋白，纯度最高可达90%以上。 | 2-3周 （不含western blot时间） |
| 目标蛋白 再加工及详细检测 | 1. 内毒素去除、除菌、冻干等进一步加工； 2. 通过HPLC、质谱等方法详细检测目标蛋白的质量。 | 加工后的终产品及相关实验和检测报告 | 2周 |
| 大规模制备 | 按照小试工艺放大生产规模，制备客户需要的合格蛋白产品。 | 合格的目标蛋白及服务报告 | 协商 |
