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小鼠血管内皮生长因子Mouse VEGF ELISA KIT

价格：¥1640

品牌：HAKATA

最新更新日期：2021-08-20 04:48

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产品说明

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小鼠血管内皮生长因子Mouse VEGF ELISA KIT(48T/96T)
VEGF简介：
VEGF属于PDGF因子家族，是A、B、C、D四种亚类的一类因子的总称，它们在血管发生过程中起重要作用。其中在血管再生和内皮细胞的再生过程中，VEGF-A扮演重要的角色。现已发现VEGF-A有许多种因切割后氨基酸数不同的亚型，其中含有的肝磷脂接合区域，能与胞外基质内的肝磷脂结合，以VEGF165量最多。VEGF-A可由多种细胞分泌的分子量为45kDa的糖蛋白。
VEGF的功能主要表现在伤口的愈合和女性生殖周期循环上。在病理组织中，VEGF能提升血管通透性。这就是肿瘤的转移和肿瘤复发的基础。在胚胎期，VEGF的作用表现为调控胚胎细胞的增殖、转移和提高内皮细胞的存活力上，通过成骨细胞和成软骨细胞的蓦集作用提升骨形成的效率。VEGF-A的功能还表现在一些如血管再生和血管通透相关联的生理过程中。肿瘤释放的细胞因子和生长因子能刺激骨髓中的巨核细胞分裂为血小板，这样就间接增加了VEGF-A向肿瘤的迁移。骨组织、心肌、肝实质、成骨细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、角化细胞、棕色脂肪组织、CD34+干细胞、内皮细胞、成纤维细胞和血管平滑肌细胞等细胞和组织均可表达 VEGF。

检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中小鼠VEGF的浓度。小鼠VEGF捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的小鼠VEGF会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠VEGF抗体后，抗小鼠VEGF抗体与小鼠VEGF接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在VEGF将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，小鼠VEGF浓度与OD₄₅₀值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中VEGF浓度。

操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。
2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温（25～28℃）孵育120分钟。对于血清或血浆标本，请加入50 ul样本分析缓冲液后加50 ul标本，如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。
4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温（25～28℃）孵育60分钟。
6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，避光室温（25～28℃）孵育20分钟。
8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25～28℃）孵育20分钟。
10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD₄₅₀值。

结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
典型数值和参考曲线

浓度pg/ml	典型OD值1	典型OD值2	OD平均值
0	0.1249	0.0991	0.112
31.25	0.2319	0.1972	0.21455
62.5	0.3368	0.2942	0.3155
125	0.4873	0.4783	0.4828
250	0.9711	0.9053	0.9382
500	1.4232	1.3579	1.39055
1000	2.1362	1.9438	2.04

小鼠VEGF参考标准曲线
小鼠血管内皮生长因子Mouse VEGF ELISA KIT(48T/96T)

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