大鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)检测试剂盒
本试剂仅供研究使用
试验原理：
P-PKC试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知P-PKC浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将P-PKC和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中P-PKC的活性浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制
| 试剂盒成份（2-8℃保存） | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
| 96/48份酶标板 | 1块板（96T） | 半块板（48T） | 即用型 |
| 塑料膜板盖 | 1块 | 半块 | 即用型 |
| 标准品：400ng/ml | 1瓶（0.6ml） | 1瓶（0.3ml） | 按说明书进行稀稀 |
| 空白对照 | 1瓶（1.0ml） | 1瓶（0.5ml） | 即用型 |
| 标准品稀释缓冲液 | 1瓶（5ml） | 1瓶（2.5ml） | 即用型 |
| 生物素标记的抗P-PKC抗体 | 1瓶（6ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 亲和链酶素-HRP | 1瓶（10ml） | 1瓶（5.0ml） | 即用型 |
| 洗涤缓冲液 | 1瓶（20ml） | 1瓶（10ml） | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 底物B | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 终止液 | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
自备材料
1． 蒸馏水。
2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3． 振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1． 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
大鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)检测试剂盒操作注意事项
1． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8． 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法
1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
1． 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：
| 400ng/ml | （6号标准品） | 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。 |
| 200ng/ml | （5号标准品） | 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 100ng/ml | （4号标准品） | 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 50ng/ml | （3号标准品） | 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 25ng/ml | （2号标准品） | 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 12.5ng/ml | （1号标准品） | 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 0ng/ml | （空白对照） | 原始浓度不用稀释直接加入50ul。 |
2． 洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
大鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)检测试剂盒操作步骤
1． 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3． 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5． 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8． 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9． 在450nm波长处测定各孔的OD值。
性能
1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与人其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
4.局限性：6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
大鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)检测试剂盒结果 判 断 与分析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的P-PKC标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的P-PKC含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围：0-400ng/ml
4、敏感度： 1.0ng/ml
XYA124Mu 【中文名称】：小鼠转化生长因子β1(TGFβ1)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta 1 (TGFb1) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA133Mu 【中文名称】：小鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Alpha (TNFa) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA134Mu 【中文名称】：小鼠肿瘤坏死因子β(TNFβ)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Beta (TNFb) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA135Mu 【中文名称】：小鼠血小板生成素(TPO)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Thrombopoietin (TPO) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA158Mu 【中文名称】：小鼠激活素AB(ACVAB)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Activin AB (ACVAB) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA160Mu 【中文名称】：小鼠α2-纤溶酶抑制因子(α2PI)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Alpha-2-Plasmin Inhibitor (a2PI) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA164Mu 【中文名称】：小鼠泛素(Ub)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Ubiquitin (Ub) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA181Mu 【中文名称】：小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶(ELA2)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Elastase 2, Neutrophil (ELA2) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA196Mu 【中文名称】：小鼠半乳糖苷酶β(GLβ)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Galactosidase Beta (GLb) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA208Mu 【中文名称】：小鼠丙酮酸激酶(PK)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Pyruvate Kinase, Liver And RBC (PK) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA225Mu 【中文名称】：小鼠心钠肽(ANP)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Atrial Natriuretic Peptide (ANP) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA235Mu 【中文名称】：小鼠补体1抑制因子(C1INH)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Complement 1 Inhibitor (C1INH) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA270Mu 【中文名称】：小鼠T-细胞激活连接蛋白(LAT)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Linker For Activation Of T-Cell (LAT) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA222Mu 【中文名称】：小鼠干扰素β(IFNβ)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Interferon Beta (IFNb) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA441Mu 【中文名称】：小鼠黄体激素(LH)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Luteinizing Hormone (LH) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA447Mu 【中文名称】：小鼠C-肽(C-Peptide)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for C-Peptide 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA451Mu 【中文名称】：小鼠激肽释放酶5(KLK5)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Kallikrein 5 (KLK5) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA696Mu 【中文名称】：小鼠二氢硫辛酸转乙酰基酶(DLAT)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Dihydrolipoyl Transacetylase (DLAT) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA569Mu 【中文名称】：小鼠P选择素(SELP)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Selectin, Platelet (SELP) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA570Mu 【中文名称】：小鼠Ⅰ型前胶原羧基端原肽(PⅠCP)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Procollagen I C-Terminal Propeptide (PICP) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYB819Mu 【中文名称】：小鼠再生胰岛衍生蛋白4(REG4)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Regenerating Islet Derived Protein 4 (REG4) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYB688Mu 【中文名称】：小鼠白介素21(IL21)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Interleukin 21 (IL21) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA609Mu 【中文名称】：小鼠谷胱甘肽S转移酶α1(GSTα1)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Glutathione S Transferase Alpha 1 (GSTa1) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA457Mu 【中文名称】：小鼠胱天蛋白酶14(CASP14)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Caspase 14 (CASP14) 【灵敏度】：9.375pg/mL
