龟分枝杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒价格,详情介绍-960化工网

龟分枝杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

价格：￥2490

品牌：YBio/钰博生物

产地：中国

最新更新日期：2021-08-24 13:12

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上海钰博生物科技有限公司

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产品属性

数量

大量

英文名	Mycobacterium cheloei SYBR qPCR Kit

保质期

一年

供应商	上海钰博生物科技有限公司

保存条件

-20℃保存

规格

50次

产品说明

龟分枝杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒
Mycobacterium cheloei SYBR qPCR Kit

产品及特点
龟分枝杆菌，放线菌纲，放线菌目。龟分枝杆菌通常感染皮肤、软组织和骨，宿主
局部或全身防御功能缺陷或外伤往往是发病的内在因素。龟分枝杆菌属于非结核分枝
杆菌，可引起肺部和伤口感染，其临床表现与结核病或其它感染性疾病非常相似，临
床医生很难根据患者的症状、体征和一般实验检查进行鉴别，从而给治疗带来很大困
难。荧光定量 PCR 是检测传染性疾病的主流技术，本产品是以荧光定量 PCR 技术为
基础开发的专门检测龟分枝杆菌的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

编号	成分	规格
试剂一	2×qPCR MagicMix	500 μL（棕色管）
试剂二	荧光 PCR 专用模板稀释液	1 mL（黄盖）
试剂三	龟分枝杆菌染料法 qPCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	龟分枝杆菌染料法 qPCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL)	50 μL（黄盖）
	使用手册	1 份

运输及保存低温运输、-20℃保存，有效期一年。
自备试剂 DNA 模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
使用方法一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（最好用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
8. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 上步制备的 PCR 阳性对照的第 4 号（浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于 1 万拷贝）或第 5 号（浓度为 1×10E5 拷贝/μL，10μL 相当于 10 万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。如果每次制备需要 200μL 样品，则 PC 和 NC 的体积也必须是 200μL。
9. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。本试剂盒免费赠送 15 次一管式病毒 DNAout，
三、设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）
10.如果只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于 PCR 阳性对照。如果做 2-3 次重复，则反应设置数量相应增加 2 或 3 倍。
11.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照管	PCR阳性对照管（2-7 管）
2×qPCR MagicMix	10μL	10 μL	各 10 μL
龟分枝杆菌染料法 qPCR引物混合液	2 μL	2 μL	各 2 μL
自备 10×ROX (见注)	2 μL	2 μL	各 2 μL
N+2 待测样品 cDNA 模板	6 μL	-	-
自备超纯水	-	6	-
第 7 步所得 PCR 阳性对照稀释液（2-7 号）	-	-	各 6μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…）

注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX，则用水替代。
12. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）。

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应（40 个循环）	95℃	15 sec
PCR 反应（40 个循环）	60℃	1 min，（采集 SYBR 通道的荧光信号）
按仪器预设程序进行熔解曲线分析

四、数据处理
13. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵
轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 cDNA 浓度的
log 值，再推算出其浓度。
14. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等
于 35。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于
30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 35 则为阴性，如果小于或等于 30 则为
阳性。如果在 30-35 之间，可结合熔解曲线判断，若样品的熔解温度与阳性对照
相同，该样本判断为阳性，否则为阴性。