微孔板用羊抗兔抗体IgG包被。特异性抗体（兔抗地赛米松），地赛米松标记的酶（酶结合物）和地赛米松标准品或样品被加入到微孔后，特异性抗体被牢固地结合在板条上的兔抗鼠抗体IgG上，与此同时，游离的地赛米松（在标准溶液或样品中）和酶结合物与特异性抗体竞争性结合。经过1小时孵育，在洗涤步骤中除去非结合(酶标记)试剂。加入色原底物 (四甲基联苯胺)，结合的酶结合物可将无色的色原转化成为有色的产物。加入硫酸，终止底物反应，在450nm波长检测吸光度就能定量检测样品中类固醇的含量。吸光度值与样品中的类固醇浓度呈反比。