| 提供商 | 北京泽平 |
| 服务名称 | 杂交瘤细胞抗体基因提取实验外包 |
| 规格 | 价格请咨询 |
| 服务内容 | 周期 | 交付内容 |
| SYBR Green dye法 | 1-2周 | ·分析报告 ·剩余引物 |
| ·引物设计与合成 | ||
| ·qPCR检测 | ||
| ·数据分析 | ||
| TaqMan探针法 | 3-5周 | ·分析报告 ·剩余引物及探针 |
| ·引物设计、合成与优化 | ||
| ·探针设计与合成 | ||
| ·qPCR检测 | ||
| ·数据分析 | ||
| 备注：客户需提供目的基因名称、NCBI编号及合格的DNA/cDNA待测样品 | ||
| 服务内容 | 周期 | 交付内容 |
| gRNA设计及合成 | 2周 | ·3个gRNA构建 ·10ug/载体研究级别质粒DNA ·测序报告 ·质粒结构图谱 ·CoA |
| 载体构建 | ||
| ·克隆至需求载体(非病毒载体/慢病毒载体) | ||
| ·质粒测序 | ||
| ·质粒制备 | ||
| 备注：客户需提供目的基因名称、NCBI编号及DNA序列信息 | ||
| 如需更多构建或大量质粒或高质量质粒,请在需求信息表中写明 | ||
| 服务内容 | 周期 | 交付内容 |
| gRNA设计、合成及构建 | 2-3周 | ·KO单克隆细胞株 ·gRNA靶点序列及目标区域测序报告 ·CoA |
| ·gRNA设计及合成 | ||
| ·克降至需求载体(非病毒载体/慢病毒载体) | ||
| ·质粒测序及制备 | ||
| 病毒制备(针对慢病毒载体） | 1-2周 | |
| 转染 | 2-3周 | |
| ·瞬时转染或病毒侵染 | ||
| ·FACS分选 | ||
| 单克隆制备及细胞建库 | 5-8周 | |
| ·单克隆制备 | ||
| ·PCR鉴定 | ||
| ·测序分析 | ||
| ·细胞建库 | ||
| 鉴定(可选） | 2-3周 | |
| ·qPCR | ||
| ·Western Blot | ||
| 备注：客户需提供目的基因名称、NCBI编号及DNA序列信息 | ||
| 如需更多克隆，请在需求信息表中写明 | ||
| 服务内容 | 周期 | 交付内容 |
| gRNA设计、合成及构建 | 2-3周 | ·KI单克隆细胞株 ·gRNA靶点序列及目标区域测序报告 ·KI同源臂序列 ·CoA |
| ·gRNA设计及合成 | ||
| ·载体构建 | ||
| ·质粒测序及制备 | ||
| 转染 | 2-5周 | |
| ·瞬时转染 | ||
| ·FACS分选 | ||
| 单克隆制备及细胞建库 | 6-10周 | |
| ·单克隆制备 | ||
| ·PCR鉴定 | ||
| ·测序分析 | ||
| ·细胞建库 | ||
| 鉴定（可选） | 2-3周 | |
| ·qPCR | ||
| ·Western Blot | ||
| 备注：客户需提供目的基因名称、NCBI编号及DNA序列信息 | ||
| 如需更多克隆，请在需求信息表中写明 | ||
| 服务内容 | 周期 | 交付内容 |
| 基因合成及密码子优化（可选） | 1-2周 | ·测序报告 |
| 载体构建 | 1-2周 | |
| ·克隆至优化的表达载体 | ||
| ·质粒测序 | ||
| ·大量质粒制备 | ||
| 表达及纯化 | 2-3周 | ·可行性报告 ·如表达可行，且QC检测后有剩余样品，提供0.1-0.5mg样品 |
| ·瞬时转染HEK293/CHO细胞 | ||
| ·蛋白纯化 | ||
| ·SDS-PAGE及UV分析 | ||
| 大量表达及纯化（可选） | 2-3周 | ·纯化蛋白 |
| ·SDS-PAGE报告 | ||
| ·CoA |
| 服务内容 | 周期 | 交付内容 |
| 基因合成及密码子优化（可选） | 1-2周 | ·测序报告 |
| 载体构建 | 2-3周 | |
| ·克隆至表达载体 | ||
| ·质粒测序 | ||
| ·大量质粒制备 | ||
| 稳定细胞系构建 | 10-12周 | ·鉴定报告 ·2管细胞（1×106细胞/管） |
| ·稳定转染及筛选 | ||
| ·鉴定（qPCR及/或FACS） | ||
| ·亚克隆 | ||
| ·鉴定（qPCR及/或FACS） | ||
| ·细胞建库 | ||
| 大量表达及纯化（可选） | 2-3周 | ·纯化蛋白 |
| ·SDS-PAGE报告 | ||
| ·CoA |
| 服务内容 | 周期 | 交付内容 |
| 基因合成及密码子优化（可选） | 1-2周 | ·测序报告 |
| 载体构建 | 2-3周 | |
| ·克隆至表达载体 | ||
| ·质粒测序 | ||
| ·大量质粒制备 | ||
| 瞬转表达评估 | 2周 | ·评估报告 |
| ·瞬时表达 | ||
| ·ELISA及/或WB检测表达水平 | ||
| 稳定细胞株开发 | 12-20周 | ·表达报告 ·2-3株稳定克隆（可选） |
| ·稳定转染及筛选 | ||
| ·MTX扩增及筛选 | ||
| ·高表达克隆筛选及稳定性筛选 | ||
| ·细胞建库 | ||
| 大量表达及纯化（可选） | 2-3周 | ·纯化蛋白 |
| ·SDS-PAGE报告 | ||
| ·CoA |
| 服务内容 | 周期 | 交付内容 |
| 基因合成及密码子优化（可选） | 1-2周 | ·测序报告 |
| 载体构建 | 2-3周 | |
| ·克隆至表达载体 | ||
| ·质粒测序 | ||
| ·大量质粒制备 | ||
| 表达及纯化 | 1-2周 | ·可行性报告 ·如表达可行，且QC检测后有剩余样品，提供1-3mg样品 |
| ·转化合适菌株 | ||
| ·小量表达及条件优化 | ||
| ·亲和纯化（上清） | ||
| ·变性复性（包涵体） | ||
| ·SDS-PAGE及UV分析 | ||
| 大量表达及纯化（可选） | 2-3周 | ·纯化蛋白 |
| ·SDS-PAGE报告 | ||
| ·CoA |
| 服务内容 | 周期 | 交付内容 |
| 载体构建 | 1-2周 | ·测序报告 |
| ·克隆至表达载体 | ||
| ·质粒测序 | ||
| ·大量质粒制备 | ||
| 病毒包装及扩增 | 2周 | |
| ·病毒包装 | ||
| ·病毒扩增 | ||
| 表达及纯化 | 2-3周 | ·可行性报告 ·如表达可行，且QC检测后有剩余样品，提供0.1-0.5mg样品 |
| ·病毒侵染细胞 | ||
| ·小量表达、纯化及条件优化 | ||
| ·SDS-PAGE及UV分析 | ||
| 大量表达及纯化（可选） | 2-3周 | ·纯化蛋白 |
| ·SDS-PAGE报告 | ||
| ·CoA |
| 服务内容 | 周期 | 交付内容 |
| 基因合成及密码子优化（可选） | 1-2周 | ·测序报告 |
| 载体构建 | 1-2周 | |
| ·克隆至表达载体 | ||
| ·质粒测序 | ||
| ·大量质粒制备 | ||
| 载体线性化及转化 | 1周 | |
| ·载体线性化 | ||
| ·转化线性化载体至合适的菌株 | ||
| ·PCR鉴定阳性转化株 | ||
| ·高拷贝转化子筛选 | ||
| 表达及纯化 | 1-2周 | ·可行性报告 ·如表达可行，且QC检测后有剩余样品，提供0.1-0.5mg样品 |
| ·小量表达、纯化及条件优化 | ||
| ·SDS-PAGE及UV分析 | ||
| 大量表达及纯化（可选） | 2-3周 | ·纯化蛋白 |
| ·SDS-PAGE报告 | ||
| ·CoA |
| 服务内容 | 周期 | 交付内容 | 备注 |
| 重组蛋白抗原制备 | |||
| ·请参阅重组蛋白表达相关服务内容 | |||
| 多肽抗原制备 | 4-6周 | ·多肽序列 ·2mg游离多肽 | 多肽抗原制备相关服务不单独提供，仅与抗体开发服务一同提供 |
| ·多肽设计 | |||
| ·多肽合成 | |||
| ·多肽偶联 | |||
| 客户提供抗原要求 | |||
| 蛋白抗原 | |||
| 总量 | 2.5-4mg/只免子 | 3-4mg/5只小鼠 | |
| 分子量 | >10kD | ||
| 电泳纯度 | >90% | ||
| 浓度 | >0.5mg/mL | ||
| 缓冲液 | PBS或经义翘确认对实验无影响的溶液 | ||
| 多肽抗原 | |||
| KLH/VLP偶联多肽 | 3-5mg/只免子 | 5mg/5只小鼠 | |
| 浓度 | >0.5mg/mL | ||
| OVA/Biotin标记多肽 | 2-3mg | ||
| 浓度 | >0.1mg/mL | ||
| 缓冲液 | PBS或经义翘确认对实验无影响的溶液 | ||
| 服务内容 | 周期 | 交付内容 | 交付标准 |
| 抗原制备 | |||
| 客户可提供抗原或定制义翘神州抗原制备服务 | |||
| 抗原复核 | 1-2天 | ·2×0.5mL/兔子免疫前血清 ·纯化抗体（每只免子30-40mL血清将全部用于纯化） ·CoA ·剩余抗原 | 血清ELISA效价＞1:64,000 |
| ·UV及SDS-PAGE分析 | |||
| 免疫及血清效价检测 | 8-10周 | ||
| ·免疫前采血 | |||
| ·2只兔子免疫 | |||
| ·血清效价检测 | |||
| ·最终采血 | |||
| 纯化（可选，依客户要求选择纯化方法） | 3天 | ||
| ·蛋白A亲和纯化 | |||
| ·抗原亲和纯化 | |||
| QC鉴定 | 3天 | ||
| ·SDS-PAGE及UV分析 | |||
| ·ELISA鉴定 | |||
| 备注：如需免疫更多免子或需求ELISA应用之外的特殊应用抗体，请在需求信息表中写明 | |||
| 服务内容 | 周期 | 交付内容 | 交付标准 |
| 抗原制备 | |||
| 客户可提供抗原或定制义翘神州抗原制备服务 | |||
| 抗原复核 | 1-2天 | ·2株阳性克隆 ·每个克隆0.1-0.5mg纯化抗体 ·每个克隆2管冻存细胞 ·CoA ·剩余抗原 | 在ELISA检测中，纯化抗体与免疫原结合 |
| ·UV及SDS-PAGE分析 | |||
| 免疫及血清效价检测 | 8-10周 | ||
| ·免疫前采血 | |||
| ·5只Balb/c小鼠免疫 | |||
| ·血清效价检测 | |||
| ·最终采血 | |||
| 融合及筛选 | 4-6周 | ||
| ·融合及筛选 | |||
| ·亚克隆及细胞扩增 | |||
| ·细胞建库 | |||
| 抗体生产及纯化 | 2-3周 | ||
| ·适当规模的杂交瘤细胞培养 | |||
| ·蛋白A纯化抗体 | |||
| QC分析 | 3天 | ||
| ·SDS-PAGE及UV分析 | |||
| ·ELISA鉴定 | |||
| 如需免疫更多小鼠或需求ELISA应用之外的特殊应用抗体，请在需求信息表中写明 | |||
| 服务内容 | 周期 | 交付内容 | 交付标准 |
| 抗原制备 | |||
| 客户可提供抗原或定制义翘神州抗原制备服务 | |||
| 抗原复核 | 1-2天 | ·1株阳性克隆的抗体重链及轻链序列 ·0.1-0.5mg纯化抗体 ·分别含有抗体重链、轻链的商业表达载体 ·CoA ·剩余抗原 | 在ELISA检测中，纯化抗体与免疫原结合 |
| ·UV及SDS-PAGE分析 | |||
| 免疫及血清效价检测 | 8-10周 | ||
| ·免疫前采血 | |||
| ·2只兔子免疫 | |||
| ·血清效价检测 | |||
| ·最终采血 | |||
| 建库及筛选 | 4-6周 | ||
| 抗体生产及纯化 | 2-3周 | ||
| ·载体构建 | |||
| ·HEK293细胞瞬转表达 | |||
| ·蛋白A纯化抗体 | |||
| QC分析 | 3天 | ||
| ·SDS-PAGE及UV分析 | |||
| ·ELISA鉴定 | |||
| 如需免疫更多免子或需求ELISA应用之外的特殊应用抗体，请在需求信息表中写明 | |||
| 服务内容 | 周期 | 交付内容 | |
| 细胞复苏 | 1-2天 | ·纯化抗体 ·SDS-PAGE报告 ·CoA | |
| ·细胞复苏及细胞计数 | |||
| 细胞驯化 | 4-6周 | ||
| ·细胞驯化至无血清或低血清培养 | |||
| ·流加工艺开发 | |||
| 生产及纯化 | 6-10周 | ||
| ·适当规模的杂交瘤细胞培养 | |||
| ·蛋白A/G纯化抗体 | |||
| QC分析 | 3天 | ||
| ·SDS-PAGE及UV分析 | |||
| 备注：客户需提供数量≥1×106的杂交瘤细胞 | |||
| 服务内容 | 周期 | 交付内容 | |
| ·RNA提取 | 3-4周 | ·抗体重链及轻链序列 ·分别含有抗体重链、轻链的商业表达载体 | |
| ·反转录 | |||
| ·PCR扩增重链及轻链序列 | |||
| ·测序验证 | |||
| ·载体构建 | |||
| 备注：客户需提供数量＞1×107的杂交瘤细胞 | |||
| 服务内容 | 周期 | 交付内容 | |
| 基因合成及密码子优化（可选） | 1-2周 | ·纯化抗体 ·SDS-PAGE报告 ·CoA | |
| 载体构建 | 1-2周 | ||
| ·分别克隆抗体重链、轻链至优化的表达载体 | |||
| ·测序验证 | |||
| ·大量质粒生产 | |||
| 表达及纯化 | 1-2周 | ||
| ·瞬时转染HEK293/CHO细胞 | |||
| ·纯化抗体 | |||
| ·精细纯化（依据需求进行） | |||
| QC分析 | 3天 | ||
| ·SDS-PAGE及UV分析 | |||
| ·HPLC-SEC纯度分析及内毒素测定（可选） | |||
| 备注：客户可提供抗体序列成质粒 | |||
| 如需高纯度和/或低内毒素等高质量抗体，请在需求信息表中写明 | |||
| 服务内容 | 周期 |
