鸡单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体(HSVⅡ-Ab)ELISA试剂盒使用说明书

英文名称：Chicken Herpes simplexvirus Ⅱ antibody,HSVⅡ-Ab ELISA Kit

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断,具体各指标使用说明书请联系客服索取，本模板为通用模板，仅供参考。 

试剂盒检测原理：

鸡单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体(HSVⅡ-Ab)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被样本 抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最 终的黄色。
颜色的深浅和样品中的样本呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法：

1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何 细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20 ℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品：

1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱

操作注意事项：

1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属 于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不 用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 浓度为0的 S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实 际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺 序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

鸡单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体(HSVⅡ-Ab)ELISA试剂盒组成：

注：标准品浓度都不相同，麻烦联系客服索取相应说明书

试剂的准备：

20×洗涤缓冲液的稀 释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板方法：

1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液 ，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

鸡单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体(HSVⅡ-Ab)ELISA试剂盒操作步骤：

1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板 条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准 品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 样本孔先 加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4. 除空白孔 外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔 ，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体 ，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用 洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm 波长处测定各孔的OD值。

结果判断

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准 品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

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