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- 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒
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上海钰博
进口/国产
2021-08-24 18:32
我要认领上海钰博生物科技有限公司
顾磊
shybio@126.com
产品属性
产品说明
细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒产品简介：1. 在研究细胞时常要研究细胞的不同组份，而研究最多的两个细胞组份就是细胞核和细胞浆。分离细胞核蛋白和细胞浆蛋白，不仅可以用于研究蛋白在细胞内的定位，而且很多时候分离出来的核蛋白可以用于转录调控方面的研究，例如EMSA(也称gelshift)，footprinting等。2. 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白与细胞浆蛋白的方法。约90分钟就可以完成培养细胞的细胞核蛋白与细胞浆蛋白的分离。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。3. 本试剂盒是通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽- 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒使用说明：
1. 准备溶液：温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适当量的细胞浆蛋白
抽提试剂A备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。取适当量的细胞核
蛋白抽提试剂备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很
紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免
用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。
3. 对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4. 每20微升细胞沉淀加入200微升添加了PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。(对于二百万Hela细胞，其
细胞沉淀的体积大约为20微升或40毫克。)
5. 最高速剧烈Vortex 5秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可
以适当延长vortex时间。)
6. 冰浴10-15分钟。
7. 加入细胞浆蛋白抽提试剂B 10微升。最高速剧烈Vortex 5秒，冰浴1分钟。
8. 最高速剧烈Vortex 5秒，4℃ 12,000-16,000g离心5分钟。
9. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以冻存。(千
万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免触及沉淀。)
10. 对于沉淀，完全吸尽残余的上清，加入50微升添加了PMSF的细胞核蛋白抽提试剂。(不吸尽上清
会带来细胞浆蛋白的污染。)
11. 最高速剧烈Vortex 15-30秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。然后放回冰浴中，每隔1-2分钟再高
速剧烈Vortex 15-30秒，共30分钟。
12. 4℃ 12,000-16,000g离心10分钟。
13. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，也可以-80℃冻
存。
14. 对于新鲜组织：
A. 把组织尽可能切成非常细小的碎片。按照20:1的比例混合适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A和B(例如
200微升细胞浆蛋白抽提试剂A中加入10微升抽提试剂B)。并加入PMSF至最终浓度为1mM配制成
组织匀浆液。按照每60mg组织加入200微升组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液，并在玻璃
匀浆器内充分匀浆。匀浆需在冰浴或4℃进行。
B. 匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内，冰浴放置15分钟。
C. 4℃ 1,500g离心5分钟。把上清转移至一预冷的塑料管中，为抽提得到的部分细胞浆蛋白。(吸上
清时千万不要触及沉淀。)
D. 对于沉淀，到了这一步已经充分匀浆，但很多细胞还没有破碎。 - 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒yb-12529R ARPM1肌动蛋白相关蛋白M1抗体 浓度1mg/ml
yb-12565R ABH1ALKB蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-12566R ACAA1乙酰辅酶A酰基转移酶1抗体 浓度1mg/ml
yb-12581R phospho-beta Actin (Tyr53)磷酸化β-肌动蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-12978R phospho-beta 2 Adrenergic Receptor (Ser346)磷酸化肾上腺素能受体β2/β2-AR 抗体 浓度1mg/ml
yb-12979R phospho-beta 2 Adrenergic Receptor (Ser355 + Ser356)磷酸化肾上腺素能受体β2/β2-AR抗体 浓度1mg/ml
yb-10130R APOD载脂蛋白D抗体 浓度1mg/ml
yb-2586R ASIC1/BNaC2/ASIC1A酸敏感离子通道1抗体 浓度1mg/ml
yb-2168R ADAR1 (C-terminus)双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗体（C端） 浓度1mg/ml
yb-3696R AF10髓系、淋巴、混合系白血病易位基因10抗体 浓度1mg/ml
yb-3681R ADCY1腺苷酸环化酶1抗体 浓度1mg/ml
yb-3680R APC腺瘤样息肉抗体 浓度1mg/ml
yb-5023R AGPAT1溶血磷脂酰基转移酶抗体 浓度1mg/ml
yb-9098R ANKS3锚蛋白重复及SAM结构域蛋白3抗体 浓度1mg/ml
yb-3047R phospho-ALK (Tyr1586)磷酸化间变型淋巴瘤激酶抗体 浓度1mg/ml
yb-5018R ACADVL酰基辅酶A脱氢酶很长链抗体 浓度1mg/ml
yb-7735R AMSH信号转导衔接结合蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-7736R ASB3锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族3抗体 浓度1mg/ml
yb-2750R Aurora C有丝分裂激酶B抗体 浓度1mg/ml
yb-3045R Phospho-Ack1 (Tyr284)磷酸化Ack1抗体 浓度1mg/ml
yb-3046R Phospho-Ack1 (Tyr326)磷酸化Ack1抗体 浓度1mg/ml
yb-3048R Phospho-beta-Arrestin 1 (Ser412)磷酸化β抑制蛋白1抗体 浓度1mg/ml
yb-3050R Phospho-Aurora A (Thr288)磷酸化有丝分裂激酶A抗体 浓度1mg/ml
yb-3003R phospho-APS(Ser598)磷酸化APS抗体 浓度1mg/ml
yb-2749R Aurora A有丝分裂激酶A抗体 浓度1mg/ml
yb-5986R AIM2干扰素诱导蛋白AIM2抗体 浓度1mg/ml
