LATEX-CRYTOCOCCUS ANTIGEN DETECTION SYSTEM
乳胶-隐球菌抗原检测系统
REF：CR1003, CR1004, CR1005
【产品名称】乳胶-隐球菌抗原检测系统
通用名称：乳胶-隐球菌抗原检测系统
商品名称：乳胶-隐球菌抗原检测系统
英文名称：LATEX-CRYTOCOCCUS ANTIGEN DETECTION SYSTEM
【包装规格】
l 说明书 1份
l 样本稀释液 10ml REF GB0020
l 隐球菌乳胶 1.5ml REF CG0020 或3.5ml REF CG0010
l 隐球菌抗原阳性对照 1ml REF CB0010
l 阴性对照 1ml REF N80110
l 链霉蛋白酶 1.75ml REF DE0010
l 链霉蛋白酶对照 2ml REF R20000
l 链霉蛋白酶抑制剂 6ml REF E10010
【预期用途】
作为隐球菌病的辅助诊断试验，本检测系统利用简单快速乳胶凝集反应对血清和脑脊液（CSF）中隐球菌的荚膜多糖抗原进行定性或半定量检测。
【检验原理】
检验原理
本检测系统利用了包被在乳胶颗粒中的抗隐球菌抗体与含有隐球菌荚膜多糖抗原的样本发生凝集反应。血清中，风湿因子（RA）的存在阻碍了此抗原的检测，本试验通过链霉蛋白酶（REF DE0010）对血清样本的预处理不仅减少了非特异干扰，而且还加强对隐球菌荚膜多糖抗原的检测。
操作流程
筛查试验操作
1) 在环状玻片的分离环中分别加入25ul隐球菌抗原阳性对照（REF CB0010），阴性对照（REF N80110）和经热处理的CSF或链霉蛋白酶处理的血清样本。
2) 每个环中加入25μl隐球菌乳胶（REF CG0020或REF CG0010）
3) 利用分离的涂药棒彻底混合环中物质
4) 室温下手动旋转或者100rpm（+/-25）旋转仪上5mins
5) 立即读数（见试验读数部分）
滴定试验操作
患者样本呈现+1或更大者需进行滴定试验。
1) 在标号1-10的试管中每个均加入100μl样本稀释液（REF GB0020），放在试管架（1:2至1:1024）。剩余稀释液留待样本在1:1024呈阳性反应时使用。
2) 在1#试管中加入100μl患者血清并混合
3) 转移100μl试管1#中溶液进入试管2#中并混合。连续如此稀释至试管10#。
4) 在环状玻片的分离环中分别加入25μl隐球菌抗原阳性对照（REF CB0010），阴性对照（REF N80110）和每个患者的血清样本
5) 每个环中加入25μl隐球菌乳胶（REF CG0020或REF CG0010）
6) 利用分离的涂药棒彻底混合环中物质
7) 室温下手动旋转或者100rpm（+/-25）旋转仪上5mins
8) 立即读数（见试验读数部分）
试验读数
在无光背景中立即读数并划分等级从阴性到4+。不可夸大。作为对照，阳性对照反应应该2+或更大一些，而阴性对照应低于1+。以下为详细反应强度等级划分依据：
阴性（-）：无可见团块的均匀颗粒悬浮液
1+：乳状背景下细小颗粒
2+：轻微团块背景下小但明显块状
3+：清晰背景下大的和小的块
4+：非常清晰背景下大块状
【主要组成成份】
l 样本稀释液（10ml，REF GB0020）：含有白蛋白和保护剂的浓缩（10×）氨基乙酸盐缓冲液（pH8.6）。
l 隐球菌乳胶（1.5ml，REF CG0020 或3.5ml，REF CG0010）：标准的乳胶颗粒是用抗兔的隐球菌球蛋白在含有保护剂的氨基乙酸盐缓冲液激活的。不能冷冻。
l 隐球菌抗原阳性对照（1ml，REF CB0010）：含有保护剂的荚膜多糖抗原。
l 阴性对照（1ml，REF N80110）：含有保护剂的普通山羊血清。
l 链霉蛋白酶（1.75ml，REF DE0010）：冷冻的含有保护剂的链霉蛋白酶。
l 链霉蛋白酶对照（2ml，REF R20000）：含有保护剂的抗兔的山羊球蛋白。
l 链霉蛋白酶抑制剂（6ml，REF E10010）：含有链霉蛋白酶抑制剂。
l 分离环玻片（REF SC0020）
需要但未提供的材料
l 蒸馏水或去离子水
l 1ml血清吸液管
l 分离的硼硅酸盐玻璃实验用试管（非硅酸盐），10或12×75mm，用于样本稀释和分装链霉蛋白酶
l 试管架
l 水浴或隔热设施（56℃）
l 木质涂棒
l 100rpm旋转仪器
l 定时器
l 吸液管（25μl和100μl）
标准校准：
标准的准备：阳性对照必须进行一个阳性反应。
校准程序：不适用，这个检测是半定量的检测。
【储存条件及有效期】
除了复水后的链霉蛋白酶，必须在-20℃或更低温度下保存外，所有试剂均在2-8℃贮藏。避免室温下延长放置时间。避免冷冻乳胶悬浮液因为这将改变凝胶的间隔尺寸，这样会造成假阳性。只要链霉蛋白酶在每月的蛋白酶活性检测中具有酶解链霉蛋白酶的活性并且在有效期内，那么分装后冷冻的链霉蛋白酶就可以使用。
【样本要求】
A.脑脊液（CSF）
1）常规操作方法收集无菌样本
2）1000×g角转速离心15分钟以确保去除所有白细胞和微粒体
3）小心吸取CSF溶液加入无菌容器并密封
4）样本可以立即处理，冷藏，在-20℃冷冻保存或者加入最终浓度为0.01％消毒原液
5）100℃孵育CSF样本5mins
6）备用（见操作流程）
B.血清
1）常规操作方法收集全血无菌样本。含抗凝血剂的样本无效。
2）室温下允许收集管中血样凝集10mins
3）1000×g角转速离心15分钟
4）小心吸取血清溶液加入无菌容器并密封
5）样本可以立即处理，冷藏，在-20℃冷冻保存或者加入最终浓度为0.01％消毒原液
6）在分装的50μl链霉蛋白酶（REF DE0010）中加入300μl血清并用封口膜密封管口
7）56℃孵育血清/链霉蛋白酶溶液30mins
8）加入1滴链霉蛋白酶抑制液（REF E10010）终止反应
9）备用（见操作流程）
【检验方法】
试剂准备
按照提示剂量用蒸馏水或去离子水制备以下试剂：
A 链霉蛋白酶 （REF DE0010）1.75ml；链霉蛋白酶应该以0.05ml(50μl)的量进行分装，然后密封，立即在-20℃或更低温度下冷冻保存。不能用硅胶管。
B 样本稀释液 （REF GB0020）稀释1:10
C 乳胶悬液必须是均匀的颗粒悬液。
D 第一次使用阴性对照液（REF N80110）应在恒温56℃下30mins灭活。
E分离环玻片（REF SC0020）每次使用后应该丢弃。
质控
乳胶对照
周期性的利用隐球菌抗原阳性对照对隐球菌乳胶试剂敏感性进行检测。如果隐球菌乳胶试剂敏感性良好，阳性对照滴度应该在1:4+1。
链霉蛋白酶对照
至少每月一次对冷冻链霉蛋白酶（REF DE0010）水解活性进行检测，按照血清样本准备的6－9步，用300μl链霉蛋白酶对照替换血清样本进行操作。同时对经过链霉蛋白酶处理的和未经处理的链霉蛋白酶对照通过利用上面筛查试验操作进行检测。未经处理的链霉蛋白酶对照应为2+或更大一些，而经过处理的应小于1+反应。若后者大于1+，则水解活性已经降低，需要重新制备链霉蛋白酶试液即复水，分装，冷冻和检测。
【参考值（参考范围）】
通常情况应该为负值。
【检验结果的解释】
结果说明
对照反应
用隐球菌乳胶检测时，隐球菌抗原阳性对照必须≥2+，而阴性对照则≤+1。如果对照不满足此条件者或者操作不正确，试验结果均无效。阴性对照的阳性反应可能是由于隐球菌乳胶污染或冷冻导致，这可导致对病人样本产生假阳性报告。链霉蛋白酶对照可检测到乳胶颗粒上兔球蛋白的存在。链霉蛋白酶对照的阳性反应不正确，结果表明可能有的试剂制备不当。
患者样本
1) 阴性：对未稀释患者的样本筛查试验呈现阴性或1+反应，则试验应报为阴性。但是1+反应可能表明有隐球菌的感染。若患者临床综合诊断为隐球菌病，则强烈推荐进行样本培养。弱反应样本（如，1+）应该检查在滴度试验检测中高滴度的前带影响。如果可疑，用1：10和1：100的样本稀释液重复进行检测。
2) 阳性：若筛查试验显示为≥2+，则应进行滴度试验进行滴定。滴度报告应为≥2+反应。
【检验方法的局限性】
阴性反应不排除隐球菌感染的可能性，特别是当某个病人进行了检测而且病人有被隐球菌感染的症状。
假阴性反应可能是由于低滴度、早期感染、免疫复合物、高滴度的前带影响或者是产生多糖较少的荚膜染色太浅而造成的。
假阳性反应可能由于以下原因而产生：风湿因子（RA）的存在，琼脂糖的脱水作用，Capnocytophaga animorsus (36), Trichosporon beigelii (25),羟乙基淀粉，含＞200mg的 Fe3+/dL，环玻片的不正确洗涤，感染HIV病毒的病人的一些非特异性反应。链霉蛋白酶的处理也可以减少血清样本的假阳性，增加滴度和的灵敏度。
【产品性能指标】
隐球菌（C.neoformans）抗原乳胶凝集试验具有诊断和预测价值。未经处理患者的血清或CSF滴度为≤1:4的阳性反应结果则表明高度隐球菌感染可能性。滴度≥1:8一般认为患有隐球菌病。一定程度上，抗原滴度与感染程度成比例，增长的滴度反映了感染程度和简单预测。降低的滴度表明对治疗的病人的有效治疗。如果滴度不降低说明治疗不充分。然而偶尔的低滴度可能持续存在于无法生存的真菌和临床治疗的一些不确定的时期。当抗原滴度被用于监测治疗效果时应尽量利用同一生产商的试剂盒，以减少试验误差。
本测试敏感性和特异性分别为93-100％，93-100％。对来源不同表型的隐球菌（C.neoformans）的多聚糖抗原的较低检测界限可以通过已知浓度纯化抗原血清尖峰来确定。血清型A抗原检测水平为0.5ng/ml；血清型B抗原在0.5ng/ml水平检测；血清型C抗原在25ng/ml水平检测；而血清型D抗原检测则在0.5ng/ml。
【注意事项】
1.所有试剂仅用于体外诊断！
2.对人的样本应该按照标准的生物危险品进行处理,预防危害的发生。