乳酸脱氢酶（LDH）生化检测试剂盒

价格：￥150

品牌：Xkbio

产地：国产

最新更新日期：2021-08-25 14:59

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产品属性

数量

英文名	Lactate dehydrogenase (LDH) test kit

CAS号

无

保质期

1年

供应商	上海晅科生物科技有限公司

保存条件

2-8℃

规格

50管/24样

产品说明

乳酸脱氢酶（LDH）生化检测试剂盒说明书

分光光度法 50 管/24 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化bing酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着 NAD+/NADH 之间互变。

测定原理：

LDH 催化 NAD+氧化乳酸生成bing酮酸，bing酮酸进一步与 2, 4 - 二硝基ben肼作用生成bing酮酸二硝基ben腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与bing酮酸浓度成正比。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：30mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂一：液体 15 mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入 10μL 试剂五和 1.3 mL 蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂三：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存；试剂四：液体 50 mL×1 瓶，4℃保存；试剂五：液体 100μL×1 支，4℃保存；

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样品测定的准备：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104 个）：提取液体积（mL）为 1000~5000：1 的比例（建议 2000 万细菌或细胞加入 1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在 EP 管中加入下列试剂）

试剂名称(μL)	测定管	对照管
样本	50	50
试剂一	250	250
试剂二	50
蒸馏水		50

充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 15min

试剂三

250

充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 15min

试剂四

750

充分混匀，室温静置 15 分钟，450 nm 下测定吸光度，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需要设一个对照管。

LDH 活力单位的计算：

1、标准条件下测定的回归曲线， y = 0.9108x+0.0037 (x 为标准品浓度，umol/mL；y 为ΔA)。
2、血清（浆）LDH 活力的计算
单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol bing酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（nmol/min/mL）=（ΔA-0.0037）÷0.9108÷T×103=73.2×ΔA
3、细胞、细菌和组织中 LDH 活力的计算

按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol bing酮酸定义为一个酶活力单位。LDH（nmol/min/mg prot）=[（ΔA-0.0037）÷0.9108×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =73.2×ΔA÷Cpr 需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。

按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol bing酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（nmol/min/g 鲜重）=[（ΔA-0.0037）÷0.9108×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =73.2×ΔA÷W

按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol bing酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（nmol/min/104 cell）= [（ΔA-0.0037）÷0.9108×V1]÷(2000×V1÷V2)÷T×103 =0.037×ΔA
V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V2：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，15 min； Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；2000：细胞或细菌总数，2000 万。
1、标准曲线线性范围为：0.1 umol/mL -2 umol/mL。
2、 ΔA 线性范围为：0.01 -2。