6-磷酸葡糖糖酸脱氢酶（6PGDH）测试盒

价格：￥1380

品牌：Xkbio

产地：国产

最新更新日期：2021-08-25 15:51

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产品属性

数量

100

英文名	6-phosphogluconate dehydrogenase (6PGDH) test kit

CAS号

无

保质期

1年

供应商	上海晅科生物科技有限公司

保存条件

2-8℃

规格

100管/96样

产品说明

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-PGDH）活性测定试说明书

微量法 100T/96S

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

磷酸戊糖途径途径中 6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和 6PGDH 依次催化 NADPH 合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外，6PGDH 逆境生理中具有重要作用。测定原理：
6PGDH 催化 6-磷酸葡萄糖酸和 NADP+生成 NADPH，NADPH 在 340 nm 有特征吸收峰，而
NADP+没有；通过测定 340nm 吸光度增加速率，计算 6PGDH 活性。

自备仪器和用品：

低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、酶标仪、96 孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 19mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存。

粗酶液提取：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104 个）：提取液体积（mL）为 1000~5000：1 的比例（建议 2000 万细菌或细胞加入 1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。

测定操作：

1. 酶标仪预热 30min，调节波长到 340 nm。
2 将试剂二和试剂三转移至试剂一中充分溶解；在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3. 取 96 孔板，依次加入 10μL 样本 190μL 试剂一，于 340nm 处测定 3min 内吸光值变化，第 10 s 吸光值记为 A1，第 190s 吸光值记为 A2。△A=A2-A1
注意：空白管只需要做一次。

相关图片：

计算公式：

使用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）6PGDH 活力的计算:
单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
6PGDH（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=2143.6×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 6PGDH 活力的计算:

按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
6PGDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=2143.6×ΔA÷Cpr

按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
6PGDH（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=2143.6×ΔA÷W

按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。6PGDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(2000×V 样÷V 样总) ÷T=1.072×ΔA V 反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d： 96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，3 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；2000：细菌或细胞总数，2000 万。