ELISA实验中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物。完整的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)检测试剂盒应该包含以下各组分:
(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);
(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);
(3)酶的底物;
(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中);
(5)结合物及标本的稀释液;
(6)洗涤液;
(7)酶反应终止液。
一、免疫吸附剂
已包被抗原或抗体的固相载体在低温(2~8℃)干燥的条件下一般可保存6个月。有些不完整的试剂盒,仅供应包被用抗原或抗体,检测人员需自行包被。以下简述固相载体和包被过程。
鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)检测试剂盒实验步骤
一、预试验
(一)抗体包被的酶标板的制备
1.以碳酸盐缓冲液将抗体稀释成适当浓度(参考:5ug/ml),加入酶标板(50ul/孔),以胶带封口,于4℃过液。
2.弃抗体液,以双蒸水冲洗3次,自然干燥后以胶带封口。此为由已知抗体包被的酶标板,备用。
(二)底物浓度的摸索
在底物缓冲液中加入不同量的底物(参考:5mg/10ml),加入酶标板中(50ul/孔),以胶带封口,37℃避光保存2h,在没有明显变色的条件下选择尽可能大的底物浓度。
(三)酶标抗原浓度的摸索
选择明确为阴性的标本,加至已包被抗体的酶标板中(50ul/ 孔);用稀释液稀释酶标抗原至适当倍数(参考:40~4000倍),同时加入酶标板中(50ul/ 孔),混合后封口后于37℃作用30min。以洗液连续冲洗5次,然后于吸水纸上拍干,加入已摸索好的底物封口后于37℃作用30min,在保持有明显变色的条件下选择尽可能小的酶标抗原浓度。
二、鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)检测试剂盒正式试验
1. 以稀释液将待检标本做适当稀释(预试中确定)加入包被有已知抗原的酶标板中(50ul/孔),加封口胶带于37℃作用30min。
2. 弃反应液,以冲洗液连续洗板5次并于吸水纸上拍干。
3. 加入酶标抗体(浓度在预试中确定)。加封口胶带后于37℃作用30min。
4. 重复第2步。
5. 加底物(浓度在预试中确定),加封口胶带后于室温下避光作用5-60 min,其间不时观察,显色满意后加终止液50ul/孔。
6. 于酶标仪测定OD值,OPD用492nm测定,TMB用450nm测定。
鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)检测试剂盒相关产品如下:ybA728Hu 人环加氧酶1(PTGS1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Prostaglandin Endoperoxide Synthase 1 (PTGS1)
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ybA687Hu 人钙结合蛋白(CR)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Calretinin (CR)
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ybB299Hu 人多巴胺受体D1(DRD1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Dopamine ReHZptor D1 (DRD1)
ybB301Ge 人不对称二甲基精氨酸(ADMA)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Asymmetrical Dimethylarginine (ADMA)
ybB302Hu 人野鼠色基因相关蛋白(AGRP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Agouti Related Protein (AGRP)
ybB303Hu 人集聚蛋白(AGRN)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Agrin (AGRN)
ybB304Hu 人补体C5转化酶(C5c)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Complement C5 Convertase (C5c)
ybB305Hu 人补体成分4b(C4b)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Complement Component 4b (C4b)
ybB309Hu 人多效生长因子(PTN)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Pleiotrophin (PTN)
ybB310Hu 人弹性蛋白酶4(ELA4)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Elastase 4 (ELA4)
ybB311Hu 人阿黑皮素原(POMC)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Proopiomelanocortin (POMC)
ybB312Hu 人分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Secretory Leukocyte Peptidase Inhibitor (SLPI)
ybB314Hu 人谷胱甘肽还原酶(GR)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Glutathione Reductase (GR)
ybB316Hu 人前胶原C端蛋白酶增强子1(PCPE1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Procollagen C Proteinase EnhanHZr 1 (PCPE1)
ybB317Hu 人穿孔素1(PRF1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Perforin 1 (PRF1)
ybB319Hu 人微管关联蛋白4(MAP4)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Microtubule Associated Protein 4 (MAP4)
ybB320Hu 人胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Thymic Stromal Lymphopoietin (TSLP)
ybA686Hu 人Ⅱ型胶原交联羧基端肽(CTXⅡ)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Cross Linked C-Telopeptide Of Type II Collagen (CTXII)
ybB323Hu 人钙调磷酸酶(CaN)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Calcineurin (CaN)