特别提示：包括逆转录酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：逆转录酶
英文名称：M-MLV (H-) Reverse Transcriptase
产品货号：SY0293
产品规格：5000U
本品适用于第一链cDNA合成，cDNA 片段长度zuì高可达12kb。也可用于低拷贝基因的检测。野生型的M-MuLV包含RNase H活性，该活性可催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA，因而在cDNA 第一条链的合成过程中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA，本品为通过基因重组技术得到的点突变型RNase H活性缺失的逆转录酶，即M-MLV (H-) Reverse Transcriptase，与M-MuLV相比，不仅改善了模板RNA可能被降解情况，且具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建。
注意事项
1）为保证反转录成功，建议使用高质量的RNA样品。
2）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。
3）如果RNA模板GC含量丰富或者具有复杂的二级结构，可以先只加RNA模板、引物和RNase free H2O混匀，65℃变性5min，冰上冷却，短暂离心后加入其他成分继续下面的反转录步骤。
4）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
使用方法
1第一条链cDNA合成（以20μl反应体系为例）
1.1 按照表【1】配制反应体系
| RNase free ddH2O | to 20μl |
| 5×Reaction Buffer | 4 μl |
| dNTP Mixture (10 mM each) | 1 μl |
| Oligo(dT)18(0.5μg/μl) |
| or Random hexamer (0.1μg/μl) |
| or GSP(Gene Speicific Primer)(2 μM) | 1 μl |
| RNase inhibitor (40 U/μl) | 0.5 μl |
| M-MLV (H-) Reverse Transcriptase | 1 μl |
| 模板RNA | Total RNA: 50ng-5μg
mRNA: 5-500ng |
| 表1 cDNA第一条链合成反应体系表 |
1.2 轻轻混匀
若使用Oligo(dT)18或基因特异性引物，42℃孵育50min。
若使用Random hexamer，25℃孵育10min，42℃孵育50min。
1.3 65℃加热15min失活M-MLV (H-) Reverse Transcriptase。
2 RT-PCR
建议取1/10～1/5体积（2～4µl）的反转录产物作为PCR模板。
2.1 按照【表2】配制反应体系表
组分体积终浓度
| cDNA模板 | 2μl | 依需要调整 |
| Forward Primer (10μM) | 1μl | 0.2 μM each |
| Reverse Primer (10μM) | 1μl | 0.2 μM each |
| 10×Taq Buffer(含Mg2+) | 5 μl | 1× |
| 2.5mM dNTPs | 4μl | 0.2 mM |
| Taq DNA Polymerase | 0.5μl | 2.5units |
| ddH2O to final volume | 50μl | / |
| 表2 RT-PCR反应体系表 |
2.2 按下列条件进行PCR反应：
储存条件：-20℃。
除了逆转录酶,，我公司还供应以下相关产品：
名称：dNTP和引物清除剂
货号：BTN131141
规格：100次
本产品是基于酶学方法的一步法清除dNTP和引物的试剂，用于在PCR结束后去除残留的dNTP和引物，使PCR产物可以不经过任何形式的回收而直接用于后续的测序等反应。
储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。
名称：一管式双链cDNA合成试剂盒
货号：BTN130308
规格：10次
本产品是用于一管式双链cDNA合成的试剂盒。cDNA第一链合成的原理是以OligodT为通用引物的、MMLV催化的逆转录反应。其原理如下：
cDNA第二链合成的原理是用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口，再用DNA Polymerase I通过切口平移(nick translation)反应进行RNA链取代合成cDNA第二链，其原理图如下：
产品特点：1. 即开即用，含有合成两条cDNA链的所有试剂。
2.适用于含poly rA的RNA，对不含poly rA的RNA(如细菌RNA)，不能使用本试剂盒制备ds cDNA。
3.一管式进行，第一链cDNA合成后不需要任何处理，直接进入第二链的合成。
4. 所得双链cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等。
5. 本试剂盒足够10次80μL体系的双链cDNA合成反应。
6. 如果需要合成全长cDNA，zuì好选用SMART全长cDNA双链合成试剂盒。
试剂盒组成：| 成分 | 规格 |
| Oligo dT引物 | 10μl |
| cDNA第一链合成缓冲液 | 40μl |
| MMLV 逆转录酶(200U/μL) | 10μl |
| 5×cDNA 第二链合成缓冲液 | 160μl |
| 20×cDNA 第二链合成酶混合液 | 40μl |
| T4 DNA聚合酶 | 20μl |
| 0.2 M EDTA溶液 | 40μl |
| 超纯水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：一：mRNA的制备
本试剂盒不提供mRNA提取试剂，用户需自备相关试剂。
二：双链cDNA的合成
1.在一个干净的塑料离心管中，按下表设置cDNA合成反应：
| 成分 | 用量 |
| 自备mRNA样品 | 4μl(0.5-2μg) |
| Oligo dT引物 | 1μL |
| 70℃ 2分钟后室温放置2分钟，短暂离心 |
| cDNA 第一链合成缓冲液 | 4μL |
| MMLV 逆转录酶 | 1μL |
| 轻柔吹打混匀后42℃保温90分钟合成第一链cDNA |
| 超纯水 | 48μL |
| cDNA 第二链合成缓冲液 | 16μL |
| cDNA 第二链合成酶混合液 | 4μL |
| 轻柔吹打混匀后，短暂离心，16℃保温2小时 |
| 自备的T4 DNA聚合酶 | 2μL |
| 轻柔吹打混匀后，16℃继续保温30分钟 |
| 0.2M EDTA溶液 | 4μL |
注：如果不需要将双链cDNA平末端化，则可以跳过T4 DNA聚合酶处理步骤。
2.电泳5μL检测cDNA质量。如果cDNA在0.5-10Kb的范围内呈模糊一片，则cDNA合格。如果没看见cDNA或有其他异常，需查找原因后再继续。
3. 所得cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA 文库构建、抑制性差减杂交等实验。
