细胞划痕实验是一种简单易行的检测细胞运动的方法,实验成本低,可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。
操作步骤
1. 先用记号笔在孔板背后,用直尺均匀得划横线,大约每隔0.5~1cm/道,横穿过孔。每孔至少穿过4条线。
2. 在孔中加入约10的5次方个细胞,具体数量因细胞不同而不同。
3. 第二天用枪头比着直尺,尽量垂直于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜。
4. 用PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。
5. 放入细胞培养箱中培养。在不同时间内取样,拍照。
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注意事项
1. 一般做划痕实验,都是在无血清或者低血清状态下培养的,否则细胞增殖就不能忽略。
2. 按照孔板背后画线的垂直方向划痕,可以形成若干交叉点,作为固定的检测点,这就解决了前后观察时位置不固定的问题。