血清血浆中miRNA含量较组织细胞或外周血低，市面上现有的试剂盒提取血清血浆小RNA的得率普遍较低，因此很难用于后续的定量检测。

本试剂盒通过一步上柱即可获得高纯度miRNA，可在10min左右完成小RNA的提取，提取小RNA（＜200nt）操作步骤最简单、重复性好、小RNA产率高。

本试剂盒提取的小RNA（Small RNA）中，长度在15～200nt范围的RNA在95%以上，基本不含有大RNA和DNA，可直接用于后续的反转录、Northern杂交、测序等应用。

应用实例：

图例1：不同血清体积对定量PCR的影响，以hsa-miR-16 qPCR为例，反转录应用血清/血浆microRNA提取试剂盒（MT0007），定量PCR试剂盒用MTT01511。

图例2：应用该血清血浆miRNA提取试剂盒（MT0003）从500μL的血清样本中获得小RNA，用血清/血浆microRNA提取试剂盒（MT0007）进行反转录，然后用microRNA荧光定量PCR试剂盒(TaqMan探针法，货号：MTTxxxxx)分别检测不同的8种miRNA表达。

试剂盒组成：

组分	MT0003A	MT0003B
血清/血浆miRNA Reagent	15mL	60mL
miRNA吸附柱	25套	100套
RNase-Free TE Buffer	5mL	5mL

储存：室温可保存2年。
自备试剂：异丙醇、乙醇、75%异丙醇、2mL EP管
注意：血清/血浆miRNA Reagent溶液中含有胍盐，其具有强烈的腐蚀性，试验时请务必佩戴防护眼镜、手套、口罩等防护措施，如有皮肤接触请立即用大量清水冲洗，再另行就医。

操作方法：

• (1)向1.5mL EP管中加入800μL血清/血浆miRNA Reagent，再加入300μL血清或血浆样本，用腕力混匀30s，室温放置5min。
  (2) 13000rpm离心5min，将上清约1mL吸入到新的2mL EP管中。加入1mL异丙醇，上下颠倒混合均匀。
  (3)将上述溶液分三次加至吸附柱中（每次约700μL），13000rpm离心15s，倒掉过柱液。
  (4)向吸附柱中加入700μL 75%异丙醇洗涤一次，13000rpm离心15s，倒掉过滤液。
  (5)向吸附柱中加入500μL无水乙醇洗涤一次，13000rpm离心15s，倒掉过滤液。
  (6)吸附柱13000rpm空离心2min，去掉残留的乙醇。
  (7)将吸附柱放入到新1.5mL EP管中，室温放置2min，使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入30μL RNase-free H2O，室温静置2min，13000rpm离心2min，洗脱产物即为提取的miRNA。（通常取10μL该产物，即可使用血清/血浆microRNA提取试剂盒进行反转录反应，货号：MT0007）。

常见问题：

• 由于血清血浆中的miRNA含量极低，提取的miRNA浓度通常在5ng/μl以下，因此难以用常规的NanoDrop测量浓度，建议直接使用10μL进行下游反转录。由于本试剂盒提取的是小RNA，该浓度下的miRNA Copy数足以进行下游检测。


• 由于血清血浆中miRNA的含量低，为了获得更可靠的实验数据，建议使用特异性和灵敏度更好的TaqMan探针法进行miRNA的下游检测。本试剂盒提取的miRNA并不限于其它检测方法和用途，包括SYBR Green法检测、二代测序、芯片等检测领域。


• 我公司的血清/血浆microRNA反转录试剂盒(MT0007)为血清血浆专用，不可用于细胞和组织的miRNA检测实验。使用血清/血浆microRNA反转录试剂盒(MT0007)获得的反转录产物仅可使用本公司的microRNA荧光定量PCR试剂盒(TaqMan探针法，货号：MTTxxxxx）。在使用血清/血浆microRNA反转录试剂盒(MT0007)反转录条件下，应用货号为MTT01511的microRNA荧光定量PCR试剂盒，检测内源hsa-miR-16，Ct值通常在24左右。