产品名称:胞外超氧化物歧化酶(SOD3)活性蛋白
物种:Homo sapiens (Human,人)
性状:冻干粉
纯度:> 95%
应用:Cell culture; Activity Assays.
缓冲液成份:20mM Tris, 150mM NaCl缓冲液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
储存:避免反复冻融。2-8°C不超过一个月,-80°C不超过12个月。
【实验原理】:
SOD是含金属辅基的酶,它催化以下反应:
02 - +02 - + 2H+ H2 02 +02
由于超氧阴离子自由基02 - 寿命短,不稳定,不易直接测定SOD活性,而采用间接的方法。目前常用的方法有3种, 包括氮蓝四唑(NBT)光化还原法,邻苯三酚自氧化法,化学发光法。本实验主要介绍光化还原法,其原理是:氮蓝四唑在蛋氨酸和核黄素存在条件下,照光后发生光化还原反应而生成蓝色甲腙,蓝色甲腙在560nm处有最大光吸收.SOD能抑制NBT的光化还原,其抑制强度与酶活性在一定范围内成正比。
试剂:
1.50m mol/l pH7.8的磷酸缓冲液(PBS) 。含0.1m mol/l EDTA
2.220m mol/l甲硫氨酸:称3.2824g甲硫氨酸\,用50m mol/l pH7.8的磷酸缓冲液定溶至100ml(现配现用)。
3.1.25m mol/l氯化硝基四氮唑蓝(NBT)溶液(现配):称NBT 0.102g,用50m mol/l pH7.8的磷酸缓冲液(PBS)溶解定容至100ml.
4.0.033m mol/l核黄素:称2.52mg 用PBS溶解定容至200ml(遮光保存)。
用法:Reconstitute in 20mM Tris, 150mM NaCl (pH8.0) to a concentration of 0.1-1.0 mg/mL. Do not vortex.