PCR产物纯化回收试剂盒

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YANJIN
国产/进口
2021-09-02 04:18

上海研谨生物科技有限公司

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上海研谨生物科技有限公司
杨芳萍
13585717991 021-65232515
yanjinbio@163.com
847724139
产品属性
保存条件室温
保质期12 个月
英文名quick Midi Purification Kit
数量500
供应商上海研谨生物
规格100次
产品说明
PCR产物纯化回收试剂盒
quick Midi Purification Kit


保存条件:本试剂盒在室温储存12 个月不影响使用效果。
产品介绍:

在高离序盐存在的情况下,DNA 片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除,最后低盐、高pH 值的洗脱缓冲液将纯净DNA 从硅基质膜上洗脱。

产品特点:

  1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
  2. 使用了优质结合液,不含传统结合液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
  3. 结合液调制成为了黄颜色,便于监测pH值变化从而达到最理想结合效果,大大提高回收效率。
  4. 简单快速、使用方便。
  5. 注意事项:
  1. 所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复
澄清,使用前应该恢复到室温.
  1. 储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果。
  2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
  3. 结合液中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。
  4. 回收纯化的DNA 片段一般在100bp40kb之间,过长、过短片段的回收效率迅速降低。
  5. 回收DNA的量和起始DNA的量,洗脱体积,DNA片断大小有关。一般1-20μg100bp-5kb DNA 片段,回收率可达95%
  6. pH≤7.5时,吸附膜吸附DNA的效率zui高。如果待纯化产物含有碱性物质过多,造成和结合液混和后pH偏高,会导致回收率降低。混和后,如果结合液依旧保持黄色,说明pH正常;如果变成橘红色或者淡紫色,说明pH偏高,可加5-10μl3M醋酸钠
pH5.2pH 值调到5-7(黄色
  1. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保pH大于7.5pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱,DNA片段应该保存在-20℃。DNA片段如果需要长期保存,可以用TE 缓冲液洗脱10mMTris-HCl1mM EDTApH8.0,但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
自备试剂:无水乙醇操作步骤:
提示:第一次使用前请先在漂洗液WB 中加入指定量无水乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
  1. 100μlPCR扩增后体系或者酶切后体系加入500μl 结合液BB,充分混匀。如果初始体系小于100μl,请事先用双蒸水调整至
100μl
  1. 将上一步所得溶液加入吸附柱EC 中(吸附柱放入收集管中,室温放置1min12,000rpm离心30-60sec,倒掉收集管中的废液。
  2. 加入500μl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!12,000rpm 离心30sec,弃掉废液。
  3. 重复操作步骤3
  1. 将吸附柱EC 放回空收集管中,12,000rpm离心2min,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
  2. 取出吸附柱EC,放入一个干净的离心管中,室温放置数分钟。
  3. 在吸附膜的中间部位滴加洗脱缓冲液EB洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中加热效果更好,室温放置2min12,000rpm 离心
1min。如果需要较多量DNA,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,离心1min(注意:洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要

DNA 浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于30μl,体积过小降DNA 洗脱效率,减少产量。)