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上海研谨生物科技有限公司
PCR产物纯化回收试剂盒
PCR产物纯化回收试剂盒
价 格:
询价
品 牌:
YANJIN
产 地:
国产/进口
最新更新日期:
2021-09-02 04:18
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上海研谨生物科技有限公司
我要认领
公司:
上海研谨生物科技有限公司
联系人:
杨芳萍
联系电话:
13585717991
021-65232515
联系邮箱:
yanjinbio@163.com
QQ:
847724139
产品属性
保存条件
室温
保质期
12 个月
英文名
quick Midi Purification Kit
数量
500
供应商
上海研谨生物
规格
100次
产品说明
PCR
产物纯化回收试剂盒
quick Midi Purification Kit
保存条件:
本试剂盒在室温储存
12
个月不影响使用效果。
产品介绍:
在高离序盐存在的情况下,
DNA
片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除,最后低盐、高
pH
值的洗脱缓冲液将纯净
DNA
从硅基质膜上洗脱。
产品特点:
离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的
弊端。
使用了优质结合液,不含传统结合液的碘化
那
钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
结合液调制成为了黄颜色,便于监测
pH
值变化从而达到
最理想
结合效果,大大提高回收效率。
简单快速、使用方便。
注意事项
:
所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在
37
℃水浴加热几分钟,即可恢复
澄清
,
使用前应该恢复到室温
.
储存于低温(
4
℃或者
-20
℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果。
避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、
pH
值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
结合液中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,
避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。
回收纯化的
DNA
片段一般在
100bp
到
40kb
之间,过长、过短片段的回收效率迅速降低。
回收
DNA
的量和起始
DNA
的量,洗脱体积,
DNA
片断大小有关。一般
1-20μg
,
100bp-5kb
的
DNA
片段,回收率可达
95%
。
pH
值
≤7.5
时,吸附膜吸附
DNA
的效率zui高。如果待纯化产物含有碱性物质过多,造成和结合液混和后
pH
偏高,会导致回收率
降低。混和后,如果结合液依旧保持黄色,说明
pH
正常;如果变成橘红色或者淡紫色,说明
pH
偏高,可加
5-10μl
3M
醋酸钠
(
pH5.2
)
将
pH
值调到
5-7
(黄色
)
。
洗脱液
EB
不含有螯合剂
EDTA
,
不影响下游酶切、连接等反应。
也可以使用水洗脱,
但应该确保
pH
大于
7.5
pH
过低影响洗
脱效率。用水洗脱,
DNA
片段应该保存在
-20
℃。
DNA
片段如果需要长期保存,可以用
TE
缓冲液洗脱
(
10mM
Tris-HCl
,
1mM E
D
T
A
,
p
H
8
.
0
)
,但是
E
D
T
A
可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
自备试剂:
无水乙醇
操作步骤:
提示:
第一次使用前请先在漂洗液
WB
中加入指定量无水乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入
!
每
100μl
PCR
扩增后体系或者酶切后体系加入
500μl
结合液
BB
,充分混匀。
(
如果初始体系小于
100μl
,请事先用双蒸水调整至
1
0
0
μ
l
)
。
将上一步所得溶液加入吸附柱
EC
中(吸附柱放入收集管中
)
,室温放置
1
m
i
n
,
1
2
,
0
0
0
r
p
m
离心
3
0
-
6
0
se
c
,倒掉收集管中的废液。
加入
5
0
0
μ
l
漂洗液
W
B
(请先检查是否已加入无水乙醇
!
)
,
1
2
,
0
0
0
r
p
m
离心
3
0
se
c
,弃掉废液。
重复操作步骤
3
。
将吸附柱
EC
放回空收集管中,
12,000rpm
离心
2min
,尽量除去漂洗液,
以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
取出吸附柱
EC
,放入一个干净的离心管中,室温放置数分钟。
在吸附膜的中间部位滴
加洗脱缓冲液
E
B
(
洗脱缓冲液事先在
6
5
-
70
℃水浴中加热效果更好
)
,室温放置
2
m
i
n
,
1
2
,
0
0
0
r
p
m
离心
1min
。如果需要较多量
DNA
,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,离心
1min
。
(
注意
:
洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要
DNA
浓度较高,可以适当减少洗脱体积,
但是最小体积不应少于
30μl
,体积过小降
DNA
洗脱效率,减少产量。
)
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