激酶活性测定的原理为，通过检测溶液中剩余ATP的量，从而检测激酶的活性。该激酶活性测定实验可适用于任何酶/底物反应，包括化合物、短肽、蛋白、脂或糖，可用于96孔板或384孔板的检测。该实验可操作性强，底物不需要同位素标记，可获得高稳定性荧光，半衰期可达5小时，可有效的区分ATP竞争性和非竞争性抑制。该实验还可用于高通量筛选化合物库，获得可靠的、重复性好的实验数据，Z’factor值>0.7。荧光信号的强度与剩余ATP的量成正比，与激酶的活性成反比，与化合物抑制酶活性的强度呈正比。