艾博因I-bio拥有生物领域经验丰富的研发团队,一直致力于研发生产高质量的科研试剂,专业的技术力量使我们能够为广大用户提供强大的技术支持,主要产品为抗体、流式抗体、ELISA试剂盒、生化试剂盒、标记试剂盒、原代细胞、细胞系和其它相关试剂。位于抚州市高新技术产业开发区新智科技园A5栋,成功入选苗圃计划重点扶植品牌,励志成为科研试剂可信赖自主创新品牌。

原代细胞是指从机体的组织或器官经胰蛋白酶、胶原酶、中性蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体环境培养的细胞。一般认为,培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。
原代细胞不仅广泛应用于分子生物学、细胞生物学和生物医学基础研究,还可应用于当今热门的生物医药产业,如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究等;原代细胞在生物医药领域有不可替代性作用。细胞传代步骤:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。细胞复苏步骤:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。细胞冻存步骤:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例; 1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

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