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巴西副球孢子菌LAMP试剂盒

价格：￥3490

品牌：沪震生物

产地：中国

最新更新日期：2021-09-03 10:17

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上海沪震实业有限公司

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公司：上海沪震实业有限公司

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产品属性

数量

英文名	Paracoccidioides brasiliensis

保质期

一年

供应商	上海沪震实业有限公司

保存条件

-20℃

规格

50次

产品说明

巴西副球孢子菌LAMP试剂盒
Paracoccidioides brasiliensis

产品及特点
巴西副球孢子菌(African Swine Fever、ASF)是由巴西副球孢子菌(African Swine Fever Virus、ASFV) 引起猪的一种急性、热性、高度接触传染性疾病，病死率几乎高达100%，ASF最近在我国爆发，给我国养猪业造成重大损失，因此ASFV 的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公司开发了简单快捷的 ASFV 可视化 LAMP 检测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA。
2. 用 LAMP 恒温扩增法扩增 ASFV 特异片段，不需要荧光 PCR 等贵重仪器。同时扩增时间只需要1小时，尤其适合现场或实验条件简陋的单位使用。
3. 检测灵敏性比PCR高10倍以上。
4. 特异性高，由于使用四条针对ASFV保守基因的特异引物，比使用2条引物的PCR专一性更高。
5. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
6. 每个反应的线性范围：10E2-10E7 拷贝/μL，最低灵敏度：10 拷贝/μL。
7.本试剂盒足够做50次 20μL体系的LAMP扩增。本产品只能用于科研。
规格及成分

成份	编号	十孔盒包装
2×可视化 UNG-LAMP MagicMix	试剂一	500μL（绿盖）
巴西副球孢子菌 LAMP 引物混合液	试剂二	200μL（白盖）
巴西副球孢子菌LAMP阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	试剂三	50μL（黄盖）
使用手册	试剂四	一份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。MRSALAMP 阳性对照最好单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：待测样品。
使用方法一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化细菌样品 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容，包括本公司的一管式病毒DNAout或其升级版柱式病毒DNAout，可去公司的官网搜索。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个样品制备，包括一个样品制备阳性对
照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。如果样品使用量为XmL，则在XmL水中加10μLMRSA LAMP阳性对照的10000倍稀释液作为样品制备阳性对照，样品制备阴性对照是直接用X mL水作为阴性对照，然后和N个样品一起进行细菌DNA提取操作，得到N+2个DNA样品。
二、LAMP（20μL 体系）
3. 反应设置：如果有N+2个DNA纯化样品，则最好设置N+4个LAMP扩增，增加 LAMP阴性对照和阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：

成分	N+2个样品管	LAMP阴性对照管	LAMP阳性对照管
2 ×可视化 UNG-LAMP MagicMix	各10μL	10μL	10μL
巴西副球孢子菌LAMP 引物混合液	各 4 μL	4 μL	4 μL
N+2 个样品 DNA	各 6 μL	--	--
LAMP 阴性对照（水）		6μL
LAMP 阳性对照（巴西副球孢子菌LAMP阳性对照的 100倍稀释液）	--	--	6μL

4. 混匀，此时反应液呈现非常浅的蓝色，由于是否有反应是跟阴性对照和反应前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反应后比对。
5. 置于 25℃5 分钟（让 UNG 灭活可能的LAMP的污染），然后放 63℃扩增60 分钟。如果是在 PCR 仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙，并且在管中加50uL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率）。
6. 80℃10 分钟灭活 Bst DNA 聚合酶和 UNG 酶。
7. 将反应管放置在白色背景（如白纸）前观察，观察反应液颜色并用手机照相留底。
8.实验结果分析。阳性对照将呈现蓝色，无模板的阴性对照将呈现无色或非常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9号为阴性，10号为阳性，此处的9号和10号跟下步的电泳照片中的9号和10号是相同的两个样品）：

9.如果需要也可以电泳确认实验结果：取 10μL LAMP 扩增产物直接进行2%琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加loading buffer），最好使用100 bpDNA Marker。如果样品为阳性，将会得到长度为200bp 的梯形扩增产物。典型的电泳结果见下图（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的9号和10号跟上步照片中的9号和10号是相同的两个样品）。

10. 注意消除环境污染，LAMP 产物易产生气溶胶，飘在空气中影响下一次实验，建议反应结束后，用紫外灭菌。先加好除阳性对照和样品以外的其它溶液，到另一个房间添加阳性对照及样品，可有效防止引物、MagicMix被污染。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！