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- 上海博湖生物科技有限公司
- 兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫检测试剂盒
¥300 - 3500
博湖
进口、国产
2021-09-03 12:02
我要认领上海博湖生物科技有限公司
韩丽君
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产品属性
| 英文名 | 兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫检测试剂盒 |
产品说明
产品名称：兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫检测试剂盒
英文名称:Rabbit TNF-α ELISA Kit反应性:Rabbit样品类型:血清/血浆/细胞培养上清| 产品名称 | 兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫检测试剂盒 |
| 英文名称 | Rabbit TNF-α ELISA Kit |
| 货号 | BH-DB790 |
检测范围:31-2000 pg/ml灵敏度:16 pg/ml
操作步骤：
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
2． 每100mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；
3． 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；
4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；
2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
4． 细胞洗涤后，转至新的预冷的离心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：| 细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
| 107个 | 0.5 mL～1 mL |
| 5×106个 | 0.2 mL～0.5 mL |
5．置于4℃摇床平台上，温和振荡15 min；
6． 14,000rpm，4℃离心15min，取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
7． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
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固定液的应用：
1．单纯固定液(1)4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以pH7 2～7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
1．单纯固定液
(1)4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以 pH 7.2～7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不 超过一个月。
(2)乙醇固定液：使用时以80％～95％的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用100%乙醇固定组织。
(3)4％的多：主要用于培养细胞的固定。
2．混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇－福尔马林，AF)固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。
(3)Bouin固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。
(4)Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
(5)Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清晰，但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效 
