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肝脏型脂肪酸结合蛋白抗体-----抗原修复的几种常用方法:
微波炉加热
在微波炉里加热0.01枸橼酸钠缓冲液(pH6.0)至沸腾后将组织芯片放入,断电,间隔5-10分钟,反复1-2次,根据玻片情况可参考采用微波加热“3-5-3法”3分钟温火沸腾后静止5分钟,再温火沸腾3分钟即可。
适用的抗原:来源于人、大鼠、小鼠的组织标本,来源于其他动物种属的组织标本。
沸热修复
电炉或水浴锅加热0.01M枸橼酸钠缓冲液(pH6.0)至95℃左右,放入组织芯片加热10-15分钟。
高压热修复
在沸水中加入EDTA(pH8.0)或0.01m枸橼酸钠缓冲溶液(pH6.0),盖上不锈钢锅盖,但不能锁定,将玻片置于金属染色架上,缓慢加压,使玻片在缓冲液中浸泡五分钟,然后将盖子锁定,小阀门将会升起来,10分钟后除去热源,置入凉水中,当小阀门沉下去后打开盖子,此方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。
酶消化方法
常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液,胰蛋白酶使用前预热37℃,消化时间约为5-30分钟,
适用于被固定遮蔽的抗原,包括 Collagen.GFAP. Complement.Cytokeratin.c-erB-2.LCA.LN.等。
肝脏型脂肪酸结合蛋白抗体操作步骤组织固定时间和所需的抗原热修复的关系:
大量的实验表明,固定时间越长的标本,它所形成的桥连就越紧密,抗原就越难以被激活,所需要的修复强度也就越强,随着固定时间的延长,组织中蛋白对温度的耐受也相应增高,这可能就是我们对固定时间长的标本加大修复强度的理论基础。
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