“XXXX”动物骨髓中性粒细胞分离液KIT说明书技术文档编号：TBD0037SOP
【产品规格】200ml/Kit
【产品组成】为方便广大用户使用，试剂内容如下：
| 名称 | 产品编号 | 规格 |
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| A | 分离液 1 | | 200ml |
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| B | 试剂 F（赠品） | F2013TBD | 200ml |
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| C | 样本稀释液（赠品） | 2010C1119 | 200ml |
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| D | 清洗液（赠品） | 2010X1118 | 200ml |
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| E | 红细胞裂解液（赠品） | NH4CL2009 | 100ml |
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| F | 说明书 | | 1 份 |
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【实验前准备】适用仪器：最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机
【检验方法】全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。
- 首先制备骨髓单细胞悬液，制备方法详见“骨髓冲洗单细胞悬液制备技术”。
- 取一支 15ml 离心管，依次小心加入分离液 1。
- 用吸管小心吸取细胞悬液样本加于分离液之液面上，400-650g ，离心 20-30min（注：如改变样本及分离液用量，需相应调整离心力及离心时间，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。
- 离心后，离心管中将出现两层环状乳白色细胞层，上层细胞为单个核细胞层，下层细胞为中性粒细胞层。
- 用吸管小心吸取分离液中的中性粒细胞层，如有红细胞混杂则加入适量红细胞裂解液（产品编号：NH4CL2009）将红细胞裂解（具体方法见“红细胞裂解液使用说明”）即得目的细胞。
- 将获得的细胞层移至另一 15ml 离心管中，向所得离心管中加入 10ml 清洗液（产品编号：
2010X1118），混匀细胞。
- 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。
- 重复 8、9、10，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。
分离图例：
【注意事项】- 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，需在取样 2h 内进行实验。
- 本实验最好不使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。
- 分离液用量大于骨髓单细胞悬液样本量时，分离效果更佳。
- 如实验后细胞得率或活性过低，请联系技术支持以寻求帮助.
【储存条件及有效期】常温保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
【参考值（参考范围）】本实验中性粒细胞提取率大于 80%。
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| 下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。 |
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| | 红细胞 | | 白细胞 | | | 血小板 |
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| | | （4.0-10.0）×109 | | |
| 含量（个/L） | （4.0-5.5）×1012 | 中性粒细胞 | 淋巴细胞 | | 单核细胞 | （1.0-3.0）×1011 |
| | | 50%-70% | 20%-40% | | 3%-8% | | |
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| 【相关实验技术方案】 | | | | | | |
- 所获得中性粒细胞的鉴定方法A.流式细胞技术B.免疫组化技术C.原位杂交技术
D.PCR 技术
【可能存在的问题及解决方法】1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：
| 出现情况 | 出现原因 | 建议解决方案 |
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| 离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层 | 转速过小或离心时间过短 | 适当增减转速 |
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| 离心后目的细胞存在于分离液中 | 转速过大或离心时间过长 |
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| 离心后白环层弥散 | 细胞密度过大 | 调整细胞密度 |
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| 离心后白环层太浅或看不见 | 细胞密度过小 |
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- 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。
- 本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。
注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以 50-100g 为基数，直至达到最佳分离效果，离心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。
