产品描述

GST标签蛋白纯化琼脂糖凝胶是由高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质，用于纯化各种表达系统融合表达的GST重组蛋白。

产品特点

纯化步骤

1. 准备buffer

结合液:PBS, pH 7.4

洗脱液:50 mM Tris-HCl, 10 mM 还原型谷胱甘肽, pH 8.0

所用水和Buffer在使用之前建议用0.22μm 或0.45μm滤膜过滤。减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

注意: 结合液和洗脱液中可加入1–10 mM DTT。

2. 样品准备

以大肠杆菌表达系统为例

1). 4℃离心30 分钟（4000 g）收集菌体，弃上清。

2). 用冷1×PBS 重悬细胞, 如果需要，可加入适量的添加剂，如非离子去污剂（NP-40）或蛋白酶抑制剂（PMSF）等。

3). 用超声波破碎法在冰上破碎菌体，直到样品破碎完全。

4) 4℃离心20分钟（12,000 g），除菌过滤，并小心将上清和沉淀分离

5).用SDS-PAGE 分析GST 融合蛋白的含量及可溶性。

3.纯化重组GST 融合蛋白

1). 轻轻重悬GST琼脂糖凝胶。

2). 吸取适量的GST琼脂糖凝胶至重力柱中,用10 倍柱体积的冷1×PBS（4°C）平衡GST琼脂糖凝胶。

3). 将制备好的含有GST 融合蛋白澄清菌液加入到层析柱中，流速控制为10-15cm/h

4). 裂解菌液全部流出层析柱后就立刻加入1×PBS清洗层析柱，所需量大约为柱体积的20 倍。

5). 用现配洗脱液洗脱融合蛋白，所需量大约为柱体积的10-15 倍.

6). 分别吸取20-50 μl GST 融合蛋白原液、流出液、洗涤液和洗脱液，通过SDS-PAGE 电泳分析各样品，确认是否存在蛋白

7). 洗脱液可以通过4℃透析或者分子筛去除游离的谷胱甘肽.。

4.树脂再生及储存

1).GST标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着使用次多较多，非特异性结合的蛋白增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时需要对树脂进行清洗。

a.去除一些沉淀或变性物质

用 2倍柱体积的6M盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用5 倍柱体积的PBS, pH 7.4 清洗。

b.去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用 3-4倍柱体积的70%乙醇或2 倍柱体积的1% Triton™X-100 清洗，然后然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。

然后加入20%乙醇4℃保存。