禽腺病毒(FADV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

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维伯鑫
2021-09-06 20:31

广州维伯鑫生物科技有限公司

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产品说明
【产品名称】
通用名称:禽腺病毒(FADV)核酸检测试剂盒(荧光PCR)
Name Fowl Adenovirus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】25T/50T/

【预期用途】
禽腺病毒(Fowl Adenovirus, FADV)是无囊膜、线性双股DNA病毒,属于腺病毒科、禽腺病毒属成员。该病毒可感染鸡、火鸡及其他禽类。FADV可致鸡发生包涵体肝炎、心包积水综合征和肌胃糜烂等疾病。该病常与禽类其他病原混合感染,感染鸡只可继发再生障碍性贫血、肝炎及产蛋量下降等。FADV呈世界性分布,病毒可经粪-口途径水平传播,也可垂直传播,给养禽业造成巨大经济损失。
本试剂盒适用于检测呼吸道分泌物棉拭子(感染I群禽腺病毒的鸡、火鸡、鹅、鹌鹑)、卵巢、输卵管、卵泡、子宫和输卵管粘膜组织、泄殖腔拭子(感染IIIII群禽腺病毒的鸡、鸭)等样本中的禽腺病毒,用于禽腺病毒感染的辅助诊断。

【检验原理】
本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术,设计一对禽腺病毒特异性引物,结合一条特异性探针[1],用荧光PCR技术对禽腺病毒的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】
包装规格25T/50T/
FADV反应液500μ1500μ2
酶液25μL×1 50μL×1
FADV阳性质控品 50μL ×1 50μL ×1
阴性质控品 250μL ×1 250μL ×1
说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。
【储存条件及有效期】-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次,有效期12个月。

适用仪器ABI 、安捷伦MX3000P/3005PLightCyclerBio-RadEppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。

【标本采集】
病死禽取卵巢、输卵管、卵泡、子宫和输卵管粘膜组织;活鸡取呼吸道拭子或泄殖腔拭子,放于1mL 50%甘油生理盐水中。

【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过6个月,标本运送应采用2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。

使用方法
  1. 样品处理(样本处理区)
1.1样本前处理
组织样品:称取样品约1g,手术剪剪碎混匀后,于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL1.5mL灭菌离心管中;泄殖腔拭子直接取100μL提取
1.2核酸提取
推荐采用广州维伯鑫生物科技股份有限公司生产的核酸提取或纯化试剂(磁珠法或离心柱法)进行核酸提取,请按照试剂说明书进行操作。
  1. 试剂配制(试剂准备区)
根据待检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照;反应管数每满10份,多配制1),每测试反应体系配制如下表:
试剂FADV反应液酶液
用量(样本数为N20μL1μL
  1. 加样(样本处理区)
将步骤1提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。
  1. PCR扩增(核酸扩增区)
  1. 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内;
  2. 设置好通道、样品信息,反应体系设置为25μL
荧光通道选择:检测通道(Reporter DyeFAM, 淬灭通道(Quencher DyeNONE,请勿选择ROX参比荧光。
  1. 推荐循环参数设置:
步骤循环数温度时间收集荧光信号
11 cycle95℃10min
240 cycles94℃15sec
55℃30sec
注意事项
1.所有操作严格按照说明书进行;
2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;
3.反应液应避光保存;
4.反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
7.实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

【参考文献】
[1]文艳玲, 禽腺病毒hexon基因克隆表达及间接ELISA和荧光PCR检测方法的建立[J]. 广西大学, 2008.

【生产企业】
企业名称:广州维伯鑫生物科技股份有限公司编:510663
生产地址:广州高新技术产业开发区科学城科丰路31G11201
电子邮箱:info@vipotion.com话:020-66377266
公司网址:http://www.vipotion.com真:020-66377267