产品介绍：
sgRNA-GFP病毒载体是慢病毒系统质粒，可直接转染或通过包装病毒感染细胞。该质粒含有gRNA骨架结构及GFP荧光标记基因，客户自行插入靶基因的特定sgRNA序列后，与spCas9共同作用，达到基因编辑的目的。
本产品通过冰盒运输，到货后请立即放入-20℃冰箱保存。

产品信息：

产品名称	sgRNA-GFP病毒载体
载体大小	9 kb
sgRNA克隆位点	Esp3 Ⅰ
Esp3 Ⅰ 酶切后片段大小	2 kb+7 kb
产品规格	10 μg/支

载体示意图：
使用说明：
请详细阅读使用说明后再开始相关实验。

1. 从-20℃冰箱中取出sgRNA-GFP病毒载体，4℃融化；
2. 按下表配置酶切反应液

样品	使用量
sgRNA-GFP	1 μg
FastDigest Esp3 I（货号：FD0454，Thermo）	0.5 μl
10×Buffer	2 μl
DEPC H2O	Up to 20 μl

1. 37℃，酶切0.5 h；
2. 终止酶切反应液，将反应液加到1%琼脂糖凝胶孔，跑胶30 min，回收7 kb片段，与退火获得的sgRNA靶向序列做连接反应；
3. 连接产物通过转化获得阳性克隆，测序成功后经过质粒抽提即可使用。

常见问题及提示：

·sgRNA-GFP病毒载体经过改造，经Esp3 Ⅰ 酶切后跑胶，可在紫外光下看到2 kb的DNA片段，方便客户观察酶切效果；
·使用时质粒尽量避免反复冻融；
·质粒到货后可通过转化冻存菌液，-80℃长期保存。