BCA蛋白法含量测试盒

¥190
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国产
2021-09-06 22:42

上海晅科生物科技有限公司

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上海晅科生物科技有限公司
朱经理
13671826025 021-62457717
2115560989@qq.com
产品属性
数量33
英文名BCA protein content test kit
CAS号
保质期1年
供应商上海晅科生物科技有限公司
保存条件2-8℃
规格100管/96样
产品说明



BCA 法蛋白含量测定试剂盒说明书

微量法 100T/96S

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定

测定意义:

样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

测定原理:

碱性条件下,蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键,能将 Cu2+还原成 Cu+2 分子的 BCA Cu+结合,生成紫色络合物,在 540-595nm 有吸收峰,562nm 处吸收峰最强。

自备仪器和用品:

台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、移液器和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂 A:液体 20mL×1 瓶,4保存。试剂 B:液体 0.4mL×1 支,4保存。标准品:液体 2mL×1 支,4℃保存。
工作液配制:临用前请根据拟用工作液体积样本数×0.2mL,将试剂 A B 按照 501
的比例混合,盖紧后充分混匀。

样品中可溶性蛋白质提取:

  1. 液体样品:澄清液体样品可以直接测定。
  2. 组织样品:按照组织质量g:提取液体积(mL)15~10 的比例建议称取约0.1g组织,加入 1mL提取液自备,根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水) 冰浴匀浆,10000rpm4离心 10min,取上清,即待测液。
  3. 细菌、细胞:按照细胞数量104:提取液体积mL500~10001 的比例(建议 500 万细胞加入1mL 提取液,冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声3 秒,间隔7 秒,总时间 3min;然后 10000rpm4,离心 10min,取上清置于冰上待测。

测定操作:

  1. 可见分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长到 562 nm,蒸馏水调零。
  2. 工作液置于 60水浴预热 30min
空白管标准管测定管
蒸馏水(μL4
标准品(μL4
待测液(μL4
工作液(μL200200200
混匀后置于 60保温 30min,于微量玻璃比色皿/96 孔板,于 562nm 处测定吸光值 A,分别记
A 空白管、A 标准管、A 测定管。

注意:空白管和标准管只需要做一次。

相关图片:


计算公式:

Cpr (mg/mL)= C 标准品×A 测定管-A 空白管)÷A 标准管-A 空白管)
=0.5×A 测定管-A 空白管)÷A 标准管-A 空白管)
Cpr (mg/g 鲜重)= C 标准品×A 测定管-A 空白管)÷A 标准管-A 空白管)÷ W
=0.5×A 测定管-A 空白管)÷A 标准管-A 空白管)÷ W W: 样本质量,g

注意事项:

BCA 法蛋白含量测定试剂盒,适用于测定蛋白浓度在 20-5000μg/ml 样品。测定前取 1-2 样做预实验,若 A 测定管-A 空白管1.5,需将样本用提取液稀释后再测定,以确保测定的准确性。