Protein A/G磁珠
Protein A/G Magnetic Beads
本产品4℃运输；保存于4℃，禁止产品冻结，长期存放请保证试剂管竖立向上，保质期24个月。
货号规格
goodYJ0031 mL
产品简介
good本产品采用新一代纳米表面生物技术，将Protein A/G高密度共价偶联在超顺磁性纳米微球表面，是纯化大多数免疫球蛋白的理想工具。与传统的Protein A/G免疫沉淀琼脂糖凝胶相比，Protein A/G磁珠具有更大的特异性表面区域及更多的表面抗体结合位点，非特异性结合低，并且每次IP和Co-IP可以节省40%的时间，使用起来简便高效。
goodProtein A/G磁珠可应用于多种样品，细胞裂解液、细胞分泌液上清、血清、动物腹水以及其它的免疫抗原等均可适用。
产品参数| 项目 | 参数 |
| 磁珠大小 | 200 nm |
| 磁珠浓度 | 10 mg/mL |
| IgG结合能力 | 0.7mg/mL |
| 应用范围 | IP，Co-IP等 |
自备试剂| 缓冲液 | 推荐配方 |
| 结合缓冲液 | 50 mM Tris, 150 mM NaCl, 0.1%~0.5%
detergent(TritonX-100, Tween 20 or NP40), pH 7.5 |
| 漂洗缓冲液 | 50 mM Tris, 150 mM NaCl, 0.1%~0.5% detergent, pH 7.5 |
| 洗脱缓冲液 | 0.1 M~0.2 M Glycine, 0.1%~0.5% detergent, pH 2.5~3.1
(or 0.1 M citric acid, 0.1%~0.5% detergent, pH 2.5~3.1) |
| 中和缓冲液 | 1 M Tris, pH 8.0 |
操作步骤good◆ 样本处理
good◆gg1. 根据样品种类选择相应的处理方法：
good◆ 样1. 根A. 血清样品：若目标蛋白丰度较高，建议用结合缓冲液或1×PBS(货号：PS110)稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10~100µg/mL，置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)；
good◆ 样1. 根B. 悬浮细胞：离心收集细胞(4℃，500×g，10min)，弃上清后称重，按每毫克细胞50µL的比例用1×PBS(货号：PS110)洗涤2次；按每毫克细胞5~10µL的比例加入结合缓冲液，同时加入蛋白酶抑制剂(货号：GRF101)，混匀后置于冰上孵育10min；离心收集上清液(4℃，14000×g，10min)，置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)；
good◆ 样1. 根C. 贴壁细胞：移去培养基，按每1.0×105个细胞150µL的比例用1×PBS(货号：PS110)洗涤两次；用细胞刮刀刮落细胞，收集至1.5mL离心管内，按每1.0×10个细胞20~30µL的比例加入结合缓冲液，同时加入蛋白酶抑制剂(货号：GRF101)，混匀后置于冰上孵育10min；离心收集上清液(4℃，14000×g，10min)，置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)；
good◆ 样1. 根D. 大肠杆菌：离心收集大肠杆菌(4℃，12000×g，2min)，弃上清后称重，按每克菌体(湿重)10mL的比例用1×PBS(货号：PS110)洗涤2次；按每克菌体(湿重)5~10mL的比例加入结合缓冲液，同时加入蛋白酶抑制剂(货号：GRF101)，重悬菌体，超声裂解细胞，离心收集上清(4℃，12000×g，10min)。
good◆ 磁珠预处理
good◆gg2. 用移液器轻柔吹打Protein A/G磁珠，使其充分混悬，取25~50µL磁珠悬液置于1.5mL 离心管中；
good◆gg3. 加入500µL结合缓冲液或1×PBS，用移液器轻柔吹打重悬磁珠，接着在磁力架上静置1 min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，吸弃上清；
good◆gg4. 重复步骤3两次；
good◆ 抗体与磁珠结合
good◆gg5. 稀释：用结合缓冲液或1×PBS稀释抗体样品至终浓度为5~50µg/mL，置于冰上备用；
good◆gg6. 结合：将500µL上步稀释好的抗体加入预处理后的磁珠中，置于翻转混合仪上孵育(常温2 h，4℃4~6h或过夜)，接着在磁力架上静置1 min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，把上清液转移到新的离心管中备用(上清液可用于检测抗体是否存在残留)，离心管中剩余的即为 抗体-磁珠复合物；
good◆gg6. 注意：结合过程中，磁珠可能会出现聚团或呈片状，属于正常现象，不会影响实验结果。
good◆gg7. 洗涤：在上一步得到的 抗体-磁珠复合物中加入500µL 结合缓冲液或1×PBS，用移液器轻柔吹打重悬磁珠，接着在磁力架上静置1 min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，吸弃上清。再重复此步骤两次；good◆ 抗原与抗体-磁珠复合物结合good◆gg8. 结合：向洗涤后的 抗体-磁珠复合物 中加入500µL步骤1制备好的样品，置于翻转混合仪上孵育(常温2 h，4℃4~6h或过夜)，接着在磁力架上静置1 min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，吸弃上清，离心管中剩余的即为 抗原-抗体-磁珠复合物；good◆gg9. 洗涤：在上一步得到的 抗原-抗体-磁珠复合物中加入1 mL 洗涤缓冲液或1×PBS，用移液器轻柔吹打重悬磁珠，接着在磁力架上静置1 min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，吸弃上清。再重复此步骤三次；good◆g10. 洗脱：本操作说明书提供以下两种抗原洗脱方案，操作者可根据后期检测的需要选择不同的抗原洗脱方法。goodgoodgoodgo•变性洗脱：此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。向步骤9洗涤后的 抗原-抗体-磁珠复合物中加入60 µL 1×SDS-PAGE上样缓冲液(货号：LT101)混合均匀，100℃加热10min。待冷却后，将离心管在磁力架上静置1 min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，收集上清，进行SDS-PAGE检测。goodgoodgoodgo•非变性洗脱：此方法洗脱的样品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。向步骤9洗涤后的 抗原-抗体-磁珠复合物中加入25~50 µL洗脱缓冲液，室温孵育10 min；将离心管在磁力架上静置1 min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，收集上清液至新的离心管，并立即加入1 µL中和缓冲液 将洗脱产物pH调节至中性，用于后期功能分析。
常见问题及对策
go◆ 如何避免磁珠在储存或使用过程中可能出现的聚集情况?go◆ 答：磁珠应保存在2~8℃，使用时应避免由于污染或干燥而导致的聚集。磁珠在低pH值的洗脱缓冲液中发生聚集属于正常现象，不影响磁珠的正常使用。在结合缓冲液和洗脱缓冲液中添加终浓度为0.1%(V/V)的非离子型去垢剂(如Triton X-100、Tween-20或NP-40)可有效防止磁珠聚集。经过低pH值洗脱操作的磁珠可以用结合缓冲液洗涤至中性，然后用含有0.1%(V/V)Tween-20的Tris buffer(pH7.5)振荡重悬磁珠，并用超声波水浴处理2min，即可使磁珠恢复均匀状态，以上处理均不影响磁珠的抗体结合效率。
go◆ 磁珠在使用过程中出现结块现象?go◆ 答：磁珠在极少数情况下会出现结块现象，一般较难振荡打散，从而导致分布不均匀，这主要是因为磁珠在磁场中放置太久而牢固地结合在一起。用超声波水浴处理2min即可打散磁珠，但要注意超声处理也会使磁珠在样品溶液中捕获的抗体脱落，因此磁珠在加样后洗脱前不宜使用该方法。
go◆ 如何提高抗体与磁珠结合效率?go◆ 答：磁珠抗体间的结合效率与抗体的种属来源及所属亚型有关，请确认抗体的类型与Protein A/G配基的亲和效率。如抗体所属亚型与Protein A/G的亲和度较低，可以通过增加抗体与磁珠的孵育时间(30~120min)、提高结合缓冲液的pH值(8~9)及降低离子强度(25~10mM NaCl)等方法提高亲和效率。
go◆ 如何提高磁珠在免疫沉淀反应中的特异性?go◆ 答：可以先将抗体与样品进行孵育，形成抗体-抗原复合物，再用Protein A/G磁珠捕获复合物。这种方法可以提高抗体与抗原的结合效率，并降低磁珠与样品接触的时间，从而提高沉淀产物的特异性。对于蛋白质/核酸共沉淀或染色质免疫共沉淀也推荐使用此法。
go◆ 如何解决磁珠易粘附管壁的现象?go◆ 答：建议使用低吸附率的耗材进行磁珠操作。另外，在缓冲液中添加0.01%~0.1%(V/V)的非离子型去垢剂(如Triton X-100、Tween-20或NP-40)可以有效降低耗材对磁珠的粘附。
注意事项
good1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；good2. 本产品仅限科研使用。 
