磷脂酶C（PLC）生化检测试剂盒

价格：￥3980

品牌：XK-SJH-A424

产地：国产

最新更新日期：2021-09-07 13:41

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产品属性

数量

100

英文名	Phospholipase C (PLC) test kit

CAS号

无

保质期

1年

供应商	上海晅科生物科技有限公司

保存条件

2-8°C

规格

50管/48样

产品说明

磷脂酶 C（ Phospholipases C，PLC ）试剂盒

分光光度法 50 管/48 样注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义
磷脂酶 C（EC 3.1.4.3）是一种水解甘油磷酸酯 C3 位点甘油磷酸酯键的脂类水解酶，广泛存
在于微生物及动植物的组织和细胞中，在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用。

测定原理

磷脂酶 C 催化水解 NPPC 产生对硝基ben酚，在 410nm 处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。

试剂组成和配制

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 55mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。

酶液提取

1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL
提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g
离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1mL 试剂一。
2. 细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后于 4℃，10000g 离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1mL 试剂一。
3. 血清：直接测定。

	空白管	测定管
样品（μL）		100
试剂一（μL）	100
试剂二（μL）	500	500
充分混匀，37℃反应 30min
试剂三（μL）	400	400
充分混匀，于 1mL 玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定 410nm 处吸光值，分别记为 A 空白管和 A 测定管，△A=A 测定管-A 空白管。

测定操作

相关图片：

酶活计算公式
标准曲线：y = 0.0191x - 0.0103，R2 = 0.9991

按照蛋白浓度计算

酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解 NPPC 产生 1nmol 对硝基ben酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC 活性（nmol/min/mg prot）=（△ A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ Cpr

按照样本质量计算

酶活性定义：每克组织每分钟水解 NPPC 产生 1nmol 对硝基ben酚所需的酶量为一个酶活力

单位。
PLC 活性（nmol/min/g 鲜重）=（△ A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷(V 样÷V 样总×W) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ W

按照细胞数量计算

酶活性定义：每 104 个细胞每分钟水解 NPPC 产生 1nmol 对硝基ben酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC 活性（nmol/min/104 cell）=（△ A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ 细胞数量

按照液体体积计算

酶活性定义：每毫升血清每分钟水解 NPPC 产生 1nmol 对硝基ben酚所需的酶量为一个酶活力单位。
PLC 活性（nmol/min/mL）= （△ A+0.0103）÷ 0.0191×V 反总÷V 样÷T
= 17.45×（△A+0.0103）
V 反总：反应总体积，1mL；V 样：加入样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；
Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min

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