pLenti-H1是一种碧云天自行研发的使用特别便捷的用于表达小RNA并同时表达绿色荧光蛋白GFP的重组慢病毒载体。该载体可以用于表达siRNA (small interference RNA)，也称RNAi (RNA interference)，或用于表达microRNA等其它小RNA。一方面，该载体可用于和pCMV-VSVG质粒(D8215)及pCAG-dR8.9(delta8.9,Δ8.9)(D8216)共同转染HEK-293T细胞以包装慢病毒；另一方面，也可单独用于直接转染细胞，用于表达siRNA、miRNA等小RNA。

pLenti-H1含有H1启动子，适合驱动小RNA的表达。同时pLenti-H1含有CMV启动子驱动表达的绿色荧光蛋白基因GFP。直接转染哺乳动物细胞后或者包装好的病毒感染哺乳动物细胞后，CMV启动子能高效启动绿色荧光蛋白GFP的表达，可以方便地通过观察绿色荧光来确定转染或感染效率，从而来推测目的小RNA的表达情况。

慢病毒(Lentivirus)是以 HIV-1(人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的病毒载体系统。它能高效的将目的基因(蛋白质编码序列或小RNA)导入动物或人的原代细胞或细胞系。慢病毒的宿主范围广，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。pLenti-H1作为慢病毒载体删除了病毒绝大部分的致病基因，保留了包装、逆转录和整合所需的 HIV-1顺式作用序列长末端重复序列（LTR），并对HIV的5’LTR进行改造，换成CMV启动子，同时对3’LTR进行了缺失突变,使病毒载体失去了自我复制能力，安全性大大提升。pLenti-H1中还加入了WRE元件，能够显著提高外源基因的表达。

pLenti-H1使用特别便捷，本载体通常仅须酶切1小时，无须酶切过夜，即可切胶回用于质粒构建。本载体由于BamH I和Xho I酶切位点之间预插入了一段长1008 bp的片段，从而可以通过电泳来区分单酶切和双酶切的片段，所以pLenti-H1用BamH I和Xho I通常双酶切1小时即可电泳切胶回收目的片段用于后续的连接反应，无需酶切过夜，这样可以显著缩短构建质粒所需的时间。目的小RNA的DNA序列合成并退火后可以直接连接入在BamH I和Xho I酶切位点之间。构建好的能表达目的小RNA的pLenti-H1质粒与慢病毒包装质粒pCMV-VSV-G(VSVG)(D8215)和pCAG-dR8.9(也称为delta8.9或Δ8.9)(D8216)共同转染到HEK-293T细胞中完成慢病毒的包装，就可以制备获得高滴度、自我复制缺陷并且能表达小RNA的重组慢病毒。

pLenti-H1为氨苄青霉素抗性。

pLenti-H1质粒的主要信息如下：

pLenti-H1质粒(8475bp)的图谱如下：

pLenti-H1插入片段附近的详细图谱见说明书：http://www.beyotime.com/Manual/D8202 pLenti-H1(慢病毒小RNA表达载体,绿色荧光).pdf

pLenti-H1中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pLenti-H1)包括：

pLenti-H1中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pLenti-H1 once)包括：

pLenti-H1质粒中推荐使用的测序引物序列如下：

H1 primer (2678–2697): 5´TCGCTATGTGTTCTGGGAAA 3´

pLenti-H1的全序列信息：pLenti-H1序列信息.txt

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