Bradford蛋白定量试剂盒
规格：60次
● 试剂盒内容及保存：产品名称 包装 贮存方式
考马斯亮蓝G-250染色液 200 ml 4℃
牛血清白蛋白(BSA)标准溶液（5 mg/ml） 2×1 ml -20℃
PBS溶液 10 ml 4℃
说明书 1份
● 储存条件和效期：考马斯亮蓝G-250染色液4℃避光保存；牛血清白蛋白标准溶液-20℃贮存。PBS溶液4℃贮存。本试剂盒有效期1年。
● 产品简介：
Bradford蛋白质浓度测定试剂盒是根据考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）法研制而成，其原理是考马斯亮蓝G-250在酸性条件下和蛋白质结合，使得染料最大吸收峰从465nm变为595nm，在一定的线性范围内，反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比，测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。
每个试剂盒可以检测1000个样品（使用微孔板）或60个样品（使用试管）
● 产品特点：1. 检测速度极快，10个样品只需不足10分钟即可完成。
2. 灵敏度高，检测浓度下限可达25μg/ml （测定浓度范围在50-1000μg/ml内有较好的线性关系），最小检测蛋白量可达0.5μg，待测样品体积为1-20μl。
3. Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M，DTT的浓度可高达5mM。然而，此方法测定蛋白浓度受高浓度的去垢剂影响，故不能适用膜蛋白样品的浓度测定。需确保测定样品中SDS浓度低于0.01%，Triton X-100浓度低于0.05%，Tween 20, 60, 80浓度低于0.015%。测定含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒（RTP7102）。
● 操作方法
微孔板测定程序：（工作范围25-1000 μg/ml）
1． G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀；
2． 1mg/ml蛋白标准品配制：室温完全溶解蛋白标准品，取20μl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液，加入80μl PBS溶液，使其终浓度为1 mg/ml。
3． 按照下表配制BSA标准测定溶液：编号 0 1 2 3 4 5 6 7 8
1 mg/ml BSA标准溶液 μl 5 mg/ml BSA标准溶液 μl
BSA标准溶液 μl 0 0.5 2.5 5 10 15 20 6 8
PBS 溶液 μl 20 19.5 17.5 15 10 5 0 14 12
BSA终浓度 μg/ml 0 25 125 250 500 750 1000 1500 2000
总体积 μl 20 μl
4． 将适当体积的待测样品加入到微孔板中，并用PBS补足到20 μl；
5． 向微孔板中加入200 μl G-250染色液，混匀，室温放置3-5分钟；
6． 测定595 nm 处的吸光值，并记录读数；以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。
7． 以A595为纵坐标，BSA含量为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。
试管测定程序：（工作范围25-1000 μg/ml）
1. G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀；
2. 1mg/ml蛋白标准品配制：室温完全溶解蛋白标准品，取120μl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液，加入480μl PBS溶液，使其终浓度为1.0 mg/ml。
3. 按照下表配制BSA标准测定溶液：编号 0 1 2 3 4 5 6 7 8
1 mg/ml BSA标准溶液 μl 5 mg/ml BSA标准溶液 μl
BSA标准溶液 μl 0 5 25 50 100 150 200 60 80
PBS 溶液 μl 200 195 175 150 100 50 0 140 120
BSA终浓度 μg/ml 0 25 125 250 500 750 1000 1500 2000
总体积 μl 200 μl
4. 将适当体积的待测样品加入到试管中，并用PBS补足到200 μl；
5. 向试管中加入3ml G-250染色液，混匀，室温放置3-5分钟；
6. 测定595 nm 处的吸光值，并记录读数；以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。
7. 以A595为纵坐标，BSA含量为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。
