人Dickkopf相关蛋白1 (DKK1)酶联免疫试剂盒对策
1.实验前检查试剂的组分及批号,确认所有组分均属于对应的试剂盒。不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用
2.避免试剂组分间的交叉污染,确保吸头、容器的干净
3.显色剂 A、B未使用前避光保存
4.孵育温度应控制在 37-38℃,孵育时间严格按照说明书操作。
5.严格按说明书要求洗板
6.放置时间(自然放置 1~2h)及离心转速(3000r/min)、离心时间(15min)应引起注意
出现随机 性的花板、跳孔现象
1.样品离心不完全,反应孔内发生凝血或残留细胞成分
2.加样时交叉污染
3.手工洗板造成的交叉污染
4.洗板机加液头堵塞导致加液不满或吸液残留量较大,造成 花板、跳孔
5.拍板时交叉污染
对策
1.充分离心, 3000rpm6分钟以上
2.加标本时尽量 避免交叉污染。如盛标本的试管周围常有血痂,易脱落,应远离酶标板
3.手工洗板时前 3次注洗液后应立即弃去,后几次再设定浸泡时间,可减少交叉污染
4.疏通加液头,使洗板时每孔均注满洗液,吸液时残留量要小
5.洗板完毕拍板时用合适的吸水纸巾,不要把无关物质拍进板孔,并尽量不要在同位置拍,以免交叉污染
人Dickkopf相关蛋白1 (DKK1)酶联免疫试剂盒假阳性
假阳性现象是一个现象,可参考上文 “灵敏度过高、板底高、高背景” 中的分析。这里只列举常见的原因及对策
1.计算 Cutoff值时使用的公式不正确,导致计算得出的CutOff值过低,从而导致出现假阳性
2.洗板时未能注满洗液或洗板次数、浸泡时间不够, 洗涤不充分,样 品中有其他成分残留 导致花板、跳孔,假阳性增多
3.血清标本处理不当,如未除去细胞成分、纤维蛋白原及其它干扰物可出现孔底由变蓝的跳孔现象,此标本重复实验结果往往是阴性
4.厂家试剂质量的变化造成
5.水质问题
6.加酶量过多(如 50uL误认为100uL)或丙肝酶稀释时加量过多
7.培养箱温度超过 37℃或酶结合物反应时间或底物显色时间超过
8.底物配制时间过长、或底物污染
9.该批样品放置时间过长,样品污染
10.移液嘴重复使用,未洗净或消毒不完全而用于加酶或底物
对策
1.CutOff值计算公式应严格参照所属产品的说明书,应注意各个酶免产品的Cutoff值计算公式不尽相同
2.严格按说明书要求洗板。调整洗板机时,应注意有时仪器标示的液量与实际液量并不相符,应根据实际情况调整至每孔注满
3.放置时间(自然放置 1~2h)及离心转速(3000r/min)、离心时间(15min)应引起注意
4.国家标准要求提高灵敏度时,厂家试剂灵敏度也相应提高,假阳率常常有所上升,但只要在合理范围,是可以接受的
5.防止蒸馏水污染
6.加酶前检查移液器调节量是否准确,稀释酶时思想要集中。
7.放入板以前要检查培养箱的温度,准确定时
8.底物应在酶反应完毕即将洗涤前 5分钟配制,注意避光
9.样品应保持新鲜,或低温保存,防止污染
10.移液嘴尽可能一次性使用
人Dickkopf相关蛋白1 (DKK1)酶联免疫试剂盒重复性差
1.样品数量不一,加样时间长短不一
2.样品加入后未混匀
3.酶标仪滤光片不对或输入波长不对
4.酶标仪测定重复性差
5.洗涤不正确
6.温育条件不一致(一次用水育,一次用恒温箱)
7.慎多加或少加酶或显色剂
8.阈值附近时阴时阳
9.加样量不足、保温时间、洗涤条件一致
对策
1.重复某一样品时,加样时间尽可能与第一次接近
2.加样后在混匀器上充分混匀
3.TMB显色用450/630波长
4.校对酶标仪
5.洗涤液注满各孔但不要溢出。洗板时反应板面向下,垂直用力甩净内容物(可多甩几次),在干净、无或少尘的吸水材料上拍干。洗板机洗板时不应有堵孔,洗涤应充分
6.恒温箱温育较水浴显色深,?OD值高出0.1-0.15,最好均采用恒温箱.如用水浴水温应控制在37℃
7.多加时显色深,少加则浅,用记号笔圈上,便于分析
8.同一样品做三个复孔,以二个(含二个以上相同结果为准)
9.尽可能使用同一移液器和装紧吸嘴重复测定标本。条件、人员等应尽量与上次保持一致
细胞:
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2 培养瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中静
置6-8小时或者过夜,以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中,37℃温浴3min左右;倒置显微镜下观
察,待细胞回缩变圆后吸弃消化液,再加入完全培养液终止消化;
3) 用吸管轻轻吹打混匀,按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代,然后补充新鲜的完全
培养基至5mL,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中培养;
4) 待细胞完全贴壁后,培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。
人Dickkopf相关蛋白1 (DKK1)酶联免疫试剂盒四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和Procell技术部
沟通由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知
细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
5. 该细胞只可用于科研
备注:由于实验所用试剂与操作环境的不同,以上方法供各实验室参考。
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鉴于产品的特殊性,请严格按照说明书操作!!!
本产品仅供科研实验,不做其它用途!!!
产品包装:盒装
性状:瓶装液体
规格:96T/48T
保存条件:2-8℃
保存期限:6个月
运输条件:2-8℃低温运输,用干冰或者生物冰袋低温运输。
性能:
1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2.灵敏度:最低检测浓度小于10 pg/ml。
3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
订货说明:
1.当天下午3点30分之前下单,可当天发货。
2.进口期货货期一般3-4周,部分产品现货请咨询业务人员。
3.客户对定制产品有特殊要求,要提前备注。
4.送货方式:快递上门,如特殊产品业务员亲自派送。
5.客户收到产品,如发现产品有破损及时与我司联系,我司会在第一时间处理。
6.笃玛品质保证,价格优势。生物种类试剂齐全,欢迎广大客户咨询订购。
人Dickkopf相关蛋白1 (DKK1)酶联免疫试剂盒1.试剂盒的保存:未开封试剂盒请置于2-8℃环境中储存,并在有效期内使用;已开封试剂盒,请尽快使用,避免稀释液长菌或组份降解失效;切勿酶标板置于-20℃环境中储存,底物溶液保存或使用时请务必避光。
2.工作试剂配制:请临用前30分钟内配妥。初次使用,各组份试剂请务必摇匀或离心,以便试剂集中到管底;因实际装量多余标示装量多余标示装量,配制工作试剂请用精准的计量工具(移液枪或量筒等)量取,切勿不经量取直接使用。
3.酶标板:铝箔袋出现漏气并不影响板的储存及使用;酶标板条可拆卸,每次根据实验需要量取孔进行操作,切勿不经拆卸用整块板来进行预实验。
4.上样:一次加样时间推荐控制在5分钟以内,并保证每孔上样量一致,以确保反应一致性。
5.孵育:实验中为防止样本蒸发或污染,请于酶标板上加盖或覆膜,稳拿轻放,防止外溅;随时观察温箱温度是否恒定于37℃,及时调整,孵育反应期间,温箱不宜开启太多次,以免影响温度平衡。
6.洗涤:确保蒸馏水水质合格;为保证每孔上样量一致,请使用多通道移液枪操作,若采用洗板机,请确保洁净度,以免污染;切勿冲洗,洗涤力道适中,垂直甩板,充分洗涤,降低边缘效应。
7.组份:不同批次实际,不可混用;不同组份瓶盖间避免交叉使用,以免污染;切勿随意替换试剂盒中组份。
8.读值:加入终止液后,请在5分钟之内读数,最迟不超过15分钟,以免产生褐色沉淀物,影响吸光度;请确保酶标仪的设置无误,滤光片经校准合格。
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