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2021-09-08 08:23
我要认领哈尔滨中科赛恩斯生物技术有限公司
樊勇
Scientia@hrbsci.com
产品属性
产品说明
实验原理
染色质免疫沉淀技术( Chromatinlmmunoprecipitation，简称ChIP ) 是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性，可以真实地反映体内蛋白因子与基因组DNA结合的状况。
染色质免疫沉淀技术（ChIP）通过与染色质片段共沉淀和PCR技术，在体内检测与特异蛋白质结合的DNA片段。ChIP技术最大的优点就是在活体细胞状态下研究了蛋白质和目的基因结合状况，减少了体外实验的误差。
在活体细胞中，先对与调节蛋白结合的染色质进行分离，然后通过一定的方法随机剪切染色质，用调节蛋白的抗体沉淀目的染色质，再通过一定手段把目的染色质上的蛋白质去除掉，最后检测鉴定共沉淀的DNA片段的特性。实验流程
- 免疫共沉淀co-IP：抗体与细胞裂解液或蛋白表达上清中相应的蛋白结合后，再与蛋白A/G（ProteinA/G）（或二抗）偶联的琼脂糖微珠孵育，通过离心得到微珠-蛋白A/G（或二抗）-抗体-目的蛋白复合物。复合物沉淀经离心洗涤后，重悬于电泳上样缓冲液，沸水浴5-10 min，在高温及还原剂的作用下，抗原与抗体解离，离心收集上清，上清中包括抗体（轻链和重链已断开）和靶标蛋白。该上清混合物经SDS-PAGE电泳分离和Western blotting显影，最终依据显影后的胶片上是否有目的蛋白条带，来判断免疫沉淀实验是否成功。
- 染色质免疫沉淀ChIP：ChIP是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。在生理状态下，把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起，通过超声或酶处理将染色质切为小片段后，利用抗原抗体的特异性识别反应， 将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来，以富集存在组蛋白修饰或者转录调控的DNA片段，再通过多种下游检测技术（定量PCR、基因芯片、测序等）来检测此富集片段的DNA序列。
- RNA免疫沉淀RIP：主要是用来研究体内RNA与蛋白结合情况，利用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，通过分离纯化，对结合在复合物上的RNA 进行RT-PCR验证或测序分析，了解转录后调控网络动态过程。
合作流程
- 咨询客服，提供实验方法、内容以及相关实验要求，项目员、技术员对实验项目进行可行性评估。
- 出具项目报价，签订实验服务合同，双方保密协议，出具详细实验方案，客户寄送实验样本和实验试剂，
- 技术员根据实验方案开展预实验，网站个人中心实时更新实验进度，实验完成出具详细实验报告。
实验须知
- 中科赛恩斯生物坚决秉承“严肃严谨、死磕真实、拒绝造假、绝对保密”的科学服务精神，以及严格的契约精神，为您提供优质实验服务。
- 根据客户实验预期效果，进行一定的实验文献检索，重要步骤均使用知名品牌试剂/设备进行每一步的操作质控。
- 严谨的预实验设置，根据说明要求设置参照样本，用2-3种方式进行实验，为正式实验提供最佳实验条件。
- 使用GraphPad 软件作图，并标记显著性，提供.pzf源始文件。分析数据的原始Al文件和导出的.tif图片，提供完整的实验报告（含：实验分组、实验结果、实验结论、实验步骤）。
