1. N端测序


服务内容
质谱方法在蛋白质测序中成为核心部分，带来的结果是蛋白质分析鉴定上的是高通量、自动化与精确性。同时Edman降解方法仍然是难度比较高的蛋白测序的重要补充。
本公司可开展蛋白质的N-端氨基酸序列测定工作：一次可以连续测定30个以上氨基酸

仪器（岛津PPSQ-21测序仪）

Edman化学降解测序介绍
蛋白质和多肽N-端测序技术是以Edman化学降解法为基础的，Edman化学降解，其基本原理是包括通过异硫青酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基的偶联，苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）环化裂解，和噻唑呤酮苯氨（ATZ）转化为苯异硫尿氨基酸（PTH- 氨基酸）三个主要的化学步骤，每个循环从蛋白质与多肽裂解一个氨基酸残基，同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个Edman降解，最后通过转移的PTH-氨基酸鉴定实现蛋白质序列的测定。因为技术原因，Edman降解无法处理N端被封闭的蛋白或多肽，例如N端被甲基化、乙酰化等的，这些蛋白多肽无法正常测序，如果确有必要的话可以考虑用蛋白酶将蛋白切割为多肽，对所得的多肽纯化后测序。因为蛋白测序判读的依据为每次化学降解所得到的氨基酸的色谱图，因此Edman降解法对于蛋白多肽的纯度要求比较高，一般要求在90%以上，而且不能含有诸如SDS等变性剂以及盐，并且对样品本身的绝对量要求也比较高。

应用领域

1. 样品来源：动物，植物，微生物等
2. 样品种类：天然蛋白，表达蛋白，融合蛋白，合成多肽等
3. 纯化方式：液相纯化，二维电泳分离，PVDF转膜等

样品要求
1.含量：建议送样量不低于 50pmol
2.状态：液体、冻干粉或PVDF转膜样品均可
3.纯度：建议95%以上纯度
4.性质：注明其溶解性，挥发性，毒性/腐蚀性等
5.信息：表观分子量；修饰信息；样品组织来源及制备方法信息
6.其它：A. N端未封闭
B.缓冲液中不要包含氨基酸成分,如甘氨酸
C.不含干扰物质：去污剂、胺、盐、氨基酸、非挥发性缓冲液、蛋白酶等
D.样品需要转膜制备时,建议将样品交由我们代为处理，并同时提供相应的电泳方法与带有mark的电泳照片
E. 样品如有特殊理化性质（如膜蛋白，特殊酶活性，特殊结构等），请详细说明
F. 若为已知序列样品，请告知预期序列信息




2.蛋白denovo测序：

适用于多氨基酸残基（如几百个以上）的多肽及蛋白测全长，

酶切加质谱,软件分析

三种酶切法：
五种酶切法：
酶：Trypsin、Chymotrypsin、Glu-C、Lys-C、ASP-N