| 产品名称： | Super Tube |
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| 商品货号： | SHC-0306 |
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| 中文名称： | 狗肾细胞 |
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| 形态特征： | 上皮细胞 |
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| 生长特性： | 贴壁生长 |
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| 特征特性： | 从表观正常的成年雌性可卡犬中建立了细胞株MDCK(ATCCCCL-34)，从中克隆建立了狗上皮样细胞株SuperTube。当维持高细胞浓度时，Supertube形成大量的小管(据报道，24孔板的每孔铺7x105细胞，３天内就能形成小管)。要形成小管，细胞需要每天两次换液以提供足够养分。与原始细胞株相比，SuperTube的c-AMP的检测水平低得多，在forskolin刺激下读出的腺苷环化酶水平也低；它的跨上皮抗性也比SuperDome(ATCCCRL-2286)和MDCK都低。在本库通过支原体检测。 |
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| 细胞污染： | HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。 |
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| 培养条件： | DMEM/F12(1:1): Ham＇s F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 优质胎牛血清，10% |
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| 传代方法： | 消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。 |
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| 细胞冻存步骤： | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。明舟生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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| 复苏细胞步骤： | 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 |
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| 细胞传代步骤： | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
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| 冻存条件： | 基础培养基+8%DMSO+20%FBS |
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