| 数量 | 现货 |
| 供应商 | 上海研卉生物科技有限公司 |
| 规格 | 5次 |
大提柱式细菌RNA提取试剂盒使用说明
| 产品及特点 | 本产品是在本公司柱式细菌RNAout(CAT#:80103)基础上开发的大提升 级产品，用于快速从各种常见的革氏阴性和革氏阳性细菌中大量提取总RNA。 跟柱式细菌RNAout 相比，它具有下列特点: 1. 单次样品处理量大，最多可以处理30 mL 细菌培养物。 2. 操作简单快速，一次提取只需要20 分钟左右。 3. 所得RNA 纯度高，OD260/OD280 一般在2.0 左右。一般不含基因DNA 污染。 4. 适用于各种革氏阴性和革氏阳性细菌。 |
| 规格及成分 | 成 份 50 次包装 溶液A 50 mL 溶液B 50 mL 大提离心吸附柱 5 套 通用洗柱液 100 mL 通用预洗脱液 5 mL RNA 洗脱液 10 mL 使用手册 1 份 |
| 运输及保存 | 常温运输，4℃保存，有效期一年。 |
| 自备试剂 | 氯仿。 |
| 使用方法 | 下面的操作步骤是针对在50 mL 塑料离心管中进行的大量提取的。 1. 在50 mL 塑料离心管中离心收集10-30 mL 新鲜细菌。注意:由于细菌 RNA 半衰期十分短，所以，必须使用最新鲜的、处于对数生长期的细菌。 2. 吸尽液体培养基，加入10 mL 溶液A，用枪充分吹打细菌沉淀，确保细 菌全部裂解，没有块状物。 5. 加入0.2 倍体积的自备氯仿(10 mL 溶液A 需2 ml 氯仿)，振荡器上充分 振荡混均30 秒。 6. 5000-7000 rmp 室温离心3-5 分钟。 7. 将上清液（约5-6 mL 的无色透明水相，有时水相比重大时，水相在下层， 有机相即蓝相在上层，吸取时应吸取透明水相）转移到一个干净的50 mL 塑料离心管中。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA 和蛋白质， 避免触及，否则将产生蛋白质和DNA 污染。为保险起见，可以留下少许 上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可 见的丝状DNA。 8. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。加入溶液B 后，溶液为乳白色。 9. 将溶液转移到离心吸附柱中，5000-7000 rpm 室温离心1 分钟，弃穿透 液。 10. 加10 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心1 分钟，弃收集管中的 穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。 11. 加10 mL 通用洗柱液，室温离心1 分钟，弃穿透液。此步可以省略。 12. 室温5000-7000 rpm 离心2 分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗 柱液会影响RNA 的使用。 13. 加入1 mL 通用预洗脱液，5000-7000 rpm 离心1 分钟。 14. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入1 mL RNA 洗 脱液。 15. 室温5000-7000 rpm 离心2 分钟，离心管中溶液即为RNA 样品，可以 立即使用或存放于-80℃待用。 16. 重复14-15 步一次，天泽的大提离心吸附柱吸附能力较强，一般第二次 洗脱还能洗脱较多的RNA。 17. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern 杂交，强烈建议用户使 用甲醛变性胶进行RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA 分子 （BioTechniques，28：414，2000）。 18. RNA 产量产率测定：将5-10 μL RNA 溶于TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之 间)检测其在OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出RNA 浓度（1 OD260 的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA 的产量（浓度X 体积)和产率(RNA 产量/组织用量)。 19. RNA 纯度测定：无污染的总RNA 的OD260/OD280 一般在1.8-2.1 之 间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分 别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR 等反应。 疑难解答 Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA 污染吗？ A：不是。用TAE 或TBE 电泳液和非变性胶电泳RNA 时容易产生此现象，天 泽基因初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基 互补或通过硼酸络合（如果使用T BE 作电泳液的话）形成的复合物，加RNase 处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议 最好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液。 |
