ELISA实验中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物。完整的猪血小板活化因子(PAF)检测试剂盒应该包含以下各组分:
(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);
(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);
(3)酶的底物;
(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中);
(5)结合物及标本的稀释液;
(6)洗涤液;
(7)酶反应终止液。
一、免疫吸附剂
已包被抗原或抗体的固相载体在低温(2~8℃)干燥的条件下一般可保存6个月。有些不完整的试剂盒,仅供应包被用抗原或抗体,检测人员需自行包被。以下简述固相载体和包被过程。
猪血小板活化因子(PAF)检测试剂盒实验步骤
一、预试验
(一)抗体包被的酶标板的制备
1.以碳酸盐缓冲液将抗体稀释成适当浓度(参考:5ug/ml),加入酶标板(50ul/孔),以胶带封口,于4℃过液。
2.弃抗体液,以双蒸水冲洗3次,自然干燥后以胶带封口。此为由已知抗体包被的酶标板,备用。
(二)底物浓度的摸索
在底物缓冲液中加入不同量的底物(参考:5mg/10ml),加入酶标板中(50ul/孔),以胶带封口,37℃避光保存2h,在没有明显变色的条件下选择尽可能大的底物浓度。
(三)酶标抗原浓度的摸索
选择明确为阴性的标本,加至已包被抗体的酶标板中(50ul/ 孔);用稀释液稀释酶标抗原至适当倍数(参考:40~4000倍),同时加入酶标板中(50ul/ 孔),混合后封口后于37℃作用30min。以洗液连续冲洗5次,然后于吸水纸上拍干,加入已摸索好的底物封口后于37℃作用30min,在保持有明显变色的条件下选择尽可能小的酶标抗原浓度。
二、猪血小板活化因子(PAF)检测试剂盒正式试验
1. 以稀释液将待检标本做适当稀释(预试中确定)加入包被有已知抗原的酶标板中(50ul/孔),加封口胶带于37℃作用30min。
2. 弃反应液,以冲洗液连续洗板5次并于吸水纸上拍干。
3. 加入酶标抗体(浓度在预试中确定)。加封口胶带后于37℃作用30min。
4. 重复第2步。
5. 加底物(浓度在预试中确定),加封口胶带后于室温下避光作用5-60 min,其间不时观察,显色满意后加终止液50ul/孔。
6. 于酶标仪测定OD值,OPD用492nm测定,TMB用450nm测定。
猪血小板活化因子(PAF)检测试剂盒相关产品如下:ybA307Mu 小鼠半乳糖凝集素7(GAL7)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Galectin 7 (GAL7)
ybA338Mu 小鼠微管关联蛋白1A(MAP1A)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Microtubule Associated Protein 1A (MAP1A)
ybB985Mu 小鼠上皮型脂肪酸结合蛋白(FABP5)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Fatty Acid Binding Protein 5, Epidermal (FABP5)
ybA115Mu 小鼠前动力蛋白2(PK2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Prokineticin 2 (PK2)
ybC011Mu 小鼠补体因子B(CFB)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Complement Factor B (CFB)
ybA117Mu 小鼠胞外超氧化物歧化酶(SOD3)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Superoxide Dismutase 3, Extracellular (SOD3)
ybB972Mu 小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Pigment Epithelium Derived Factor (PEDF)
ybB310Mu 小鼠弹性蛋白酶4(ELA4)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Elastase 4 (ELA4)
ybA567Mu 小鼠S100钙结合蛋白B(S100B)ELISA试剂盒 ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein B (S100B)
ybB028Mu 小鼠白蛋白(ALB)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Albumin (ALB)
ybA519Mu 小鼠载脂蛋白A1(APOA1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Apolipoprotein A1 (APOA1)
ybB571Mu 小鼠胸腺激活调节趋化因子(TARC)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Thymus Activation Regulated Chemokine (TARC)
ybB887Mu 小鼠Apelin 13蛋白(AP13)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Apelin 13 (AP13)
ybB179Mu 小鼠白介素31(IL31)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Interleukin 31 (IL31)
ybA213Mu 小鼠髓细胞触发受体1(TREM1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Triggering Receptor Expressed On Myeloid Cells 1 (TREM1)
ybA214Mu 小鼠窖蛋白(CAV1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Caveolin 1 (CAV1)
ybA734Mu 小鼠蛋白C(PROC)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Protein C (PROC)
ybB079Mu 小鼠通用转录因子ⅡH肽1(GTF2H1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for General Transcription Factor IIH, Polypeptide 1 (GTF2H1)
ybA149Mu 小鼠Ⅳ型胶原α1(COL4α1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Collagen Type IV Alpha 1 (COL4a1)
ybA147Mu 小鼠脂联素受体1(ADIPOR1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Adiponectin Receptor 1 (ADIPOR1)
ybA162Mu 小鼠嗅素4(OLFM4)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Olfactomedin 4 (OLFM4)
ybA159Mu 小鼠鳞状细胞癌抗原2(SCCA2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Squamous Cell Carcinoma Antigen 2 (SCCA2)
ybA746Mu 小鼠成纤维细胞生长因子23(FGF23)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 23 (FGF23)
ybB197Mu 小鼠软骨寡聚基质蛋白(COMP)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Cartilage Oligomeric Matrix Protein (COMP)
ybA998Mu 小鼠磷脂酰肌醇蛋白聚糖4(GPC4)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Glypican 4 (GPC4)
ybB589Mu 小鼠干扰素调节因子3(IRF3)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Interferon Regulatory Factor 3 (IRF3)
ybC350Mu 小鼠末端补体复合体C5b-9(C5b-9)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Terminal Complement Complex C5b-9 (C5b-9)
ybA183Mu 小鼠半乳糖苷酶α(GLα)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Galactosidase Alpha (GLa)