SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒把所需的缓冲液、SDS等预混于下层胶缓冲液(4×)(用于配制分离胶)和上层胶缓冲液(4×)(用于配制浓缩胶),分别含有Tris-HCl(pH8.8)、SDS和Tris-HCl(pH6.8)、SDS,30T一般可以配制30~40块,具体配制的量应根据器具大小决定。
聚烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE),其原理在于聚烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应。它有两种形式:非变性聚烯酰胺凝胶及SDS-聚烯酰胺凝胶(SDS-PAGE);非变性聚烯酰胺凝胶蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开,主要用于分离蛋白质和寡核苷酸。
操作步骤(仅供参考):
1、 配制10%过硫:直接在0.5g Ammonium Persulfate中加入5ml蒸馏水,充分溶解,分装成小份储存于-20℃或4℃。
2、 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度,按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶(下层胶):