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游离血红蛋白(f-Hb)试剂盒的基本原理有三条:
(1)抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫学活性。
(2)抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性。
(3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。
完整的游离血红蛋白(f-Hb)试剂盒包含以下各组分:
(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)。
(2)酶标记的抗原或抗体(结合物)。
(3)酶的底物。
(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中)。
(5)结合物及标本的稀释液。
(6)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水。
(7)酶反应终止液,常用的HRP反应终止液为硫酸,其浓度按加量及比色液的最终体积而异,在板式ELISA中一般采用2mol/L。
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