公司生产的RGC-5,大鼠视网膜神经节细胞质量佳,发货速度快,售后有保证。可支持各大院校先票货
培养条件
RGC-5,大鼠视网膜神经节细胞DMEM培养基,90%;优质胎牛血清,10%
气相:空气,95%;二氧化碳,5%
温度:37摄氏度
细胞描述
RGC-5,大鼠视网膜神经节细胞细胞生长:贴壁生长
细胞形态:单层生长,轴突相互连接
细胞数量:1×106个
细胞传代:1:3~1:6传代;2~3天换液1次
细胞特性:RGC-5细胞系细胞膜或者细胞内表达的物质都与RGCs相同,阳性表达物有Thy-1(RGCs的膜标记蛋白)、Brn-3C、Neuritin、NMDA受体、GABA-B受体、突触素、多种神经营养因子的受体(TrkA、TrkB、TrkC、p75NTR等膜生长因子的受体)、睫状神经营养因子、胶质细胞源性神经生长因子、神经营养因子-3、神经营养因子-4、神经纤维丝蛋白-106 和-200(neurofilament protein、NF-106、NF-200)。不表达的有GFAP-胶质原纤维酸性蛋白(Muller细胞标记物)、突触融合蛋白、8A-1(水平细胞标记物)、HPC-1(无长突细胞标记物)。
细胞纯度:93%
细胞活力:87%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
细胞检测:细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
细胞冻存:液氮冻存(基础培养基+10%DMSO+20%FBS)
细胞运输:干冰运输(1 Vial)或活细胞运输(T-25 flasks)
细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗
细胞传代:
RGC-5,大鼠视网膜神经节细胞1. 显微镜下观察细胞,神经干细胞悬浮成“神经球”生长,通常情况下,每两天换液一次,每四天传代一次。
2. 在生物安全柜或者超净台中,将培养瓶中的含有神经球的培养基转移到15ml离心管中。
3. 500rpm离心5分钟,收集神经干细胞。
4. 加入1ml 0.125%含有EDTA的胰酶,在超净工作台中轻轻吹打10次,注意不要消化太久,消化的目的是缩小神经球的体积,不要消化能单个神经干细胞,那样会影响其生长速度。
5. 然后加入5ml培养基,吹打均匀后1000rpm 离心5分钟。
6. 离心后,去掉上清,用新鲜培养基重悬细胞,按照1:2-1:3的比例进行细胞传代培养。
细胞复苏:
1. RGC-5,大鼠视网膜神经节细胞取出冻存管后,投入37℃水浴中,震荡解冻2 min。
2. 酒精消毒管壁外侧后,将其转入超净台中,将管内细胞转移至离心管中,加入5 ml 37℃预热的DMEM/F12+10%FBS培养基。
3. 将离心管离心(1000rpm,5 min)。
4. 弃去上清,再加入2ml DMEM/F12+1%N2+2%B27完全培养基,转入培养瓶中培养。
细胞冻存:液氮冻存(冻存液:DMEM/F12+10%FBS+10%DMSO)。
细胞运输:干冰运输(冻存管)/ 常温运输(T-25培养瓶)
细胞鉴定:神经干细胞采用nestin免疫荧光染色鉴定。左图是白光视野中的“神经球”形态,放大倍数为200x,右图为nestin染色后的荧光图片(绿色),放大倍数为200x。
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RGC-5,大鼠视网膜神经节细胞悬浮细胞的传代
悬浮细胞传代比贴壁细胞传代稍微简单一些。由于细胞已经在生长培养基中悬浮,因此无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离,整个过程较为迅速,对细胞的损伤也较小。悬浮培养时不进行生长培养基的更换;而是每 2 到 3 天加料一次,直到细胞汇合。可以直接在培养瓶中稀释细胞,然后继续培养扩增,或者也可以从培养瓶中取出一部分细胞,将余下的细胞稀释到该细胞系适宜的接种密度。悬浮细胞传代后的延滞期一般比贴壁细胞短。