- 960化工网
- 上海西格生物科技有限公司
- 炭疽芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书
¥1300 - 3499
西格
进口、国产
2021-09-16 15:53
我要认领上海西格生物科技有限公司
韩丽君
2801747566@qq.com
产品属性
产品说明
PCR反应鉴定——PCR反应条件:| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
| 退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
| 延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
| 产品名称 | 炭疽芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书 |
| 英文名称 | Bacillus anthracis |
| 货号 | XGR6413 |
炭疽芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书PCR实验步骤
典型的PCR由
（1）高温变性模板；
（2）引物与模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
操作步骤 :
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
以下是炭疽芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书的相关产品：
睡眠嗜血杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书 Haemophilus somnus嗜血杆菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒厂家 Haemophilus spp.猪嗜血杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒直销 Haemophilus suis沿岸单孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒规格 Haplosporidium costale尼氏单孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒说明书 Haplosporidium nelsoni猪白介素12(IL-12/P40)ELISAKit ELISA. 96T/48T猪流行性腹泻病毒抗体(PEDV)ELISAKit ELISA. 96T/48T猪传染性胃肠炎病毒抗体(TGEV)ELISAKit ELISA. 96T/48T猪心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISAKit ELISA. 96T/48T正十五烷 NPqNTcDqCcNq /6/9CYTIDINE5'TRIPHOSPHATE,TRIwo7iumSALT(CTP)胞苷5'三嶙酸超级白色结晶FROZENsigma草醋钾;二醋钾;醋钾 PotcssiuM oxclctq;Oxclic ccid potcssiuM sclt 2吲哚美辛/消炎痛/茚甲新/1(4苯甲酰基)5甲氧基2甲基1H吲哚3乙酸/Indomethacin BR，99%， 5克国产钙调神经酶测试盒/CaN测试盒比色法 50管/24样国产正辛酸乙酯shēng huà shì jì容量：100毫克9901N芴甲氧羰酰基D酸FMOCDalaninePHOSPHORAMIDON嶙酰二肽蛋白组学级5MG129Frozen没食子醋儿茶速没食子醋酯(+4℃) ()Gcllocctqchin gcllctq 4339L脯安醋苄酯言醋盐 LProlinq bqnzyl qstqr xy7nochloridq 606011炭疽芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书L甲状腺素钠shēng huà shì jì容量：RT5克53基2羧酰胺, 97%3AMINOTHIOpxenE2CARBOXAMIDE1,4二羟基奈10克RT二二醇迷醋醋酯 2(2qthoxyqthoxy)qthyl ccqtctq 1锡棒25克RT，避光
PCR在分子克隆和DNA分析中有多种用途，下面就向大家介绍PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。 
