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- 上海雅吉生物科技有限公司
- 猪流感病毒(通用型)实时荧光定量PCR试剂盒
￥2800
雅吉生物
中国
2021-09-22 17:15
我要认领上海雅吉生物科技有限公司
高杰
yajikit@163.com
产品属性
产品说明
产品名称：猪流感病毒(通用型)实时荧光定量PCR试剂盒我公司提供各指标PCR试剂盒，Elisa试剂盒和胶体金试纸条，还可以定制PCR试剂盒，欢迎新老客户来电咨询报价索取说明书。【包装规格】 50T/盒
【预期用途】
本试剂盒利用实时荧光PCR原理，定性检测，对引起的疾病诊断及疗效评估有重要指导意义。
【检验原理】
本试剂盒针对的高度保守区域设计特异性引物和探针，在反应体系中含基因组模板的情况下，PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相应通道信号进行实时监测和输出，实现检测结果的定性分析。
【主要组成成份】| 序号 | 组成 | 25T/盒 | 50T/盒 |
| 1 | RT-PCR反应液 | 375 μL×1管 | 750 μL×1管 |
| 2 | 逆转录酶 | 50 μL×1管 | 100 μL×1管 |
| 3 | Taq酶 | 75 μL×1管 | 150 μL×1管 |
| 4 | 阳性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
| 5 | 阴性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
| 6 | 说明书 | 1份 | 1份 |
注：阴性对照为偶蹄兽类基因组DNA，阳性对照为失去活性的cDNA。
猪流感病毒(通用型)实时荧光定量PCR试剂盒部分产品图片如下：
【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期12个月。
【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。
【样本要求】
1. 适用标本类型：发病动物血液、空肠及小肠肠内容物及组织脏器(肠道组织、肠系膜及淋巴结等)和病毒培养液。
2. 标本采集，方法如下：
(1) 血清：用一次性注射器取静脉血2-3ml，转至5ml 的干燥管中，密闭送检。
(2) 肠内容物：无菌条件下取肠道内容物约1g 左右，置入1ml 含有1.0ml PBS(或生理盐水)的5ml 离心管中，立即送检。
(3) 组织脏器：取发病动物肠道组织及肠系膜淋巴结等组织约1g，置一1.5ml的洁净离心管中，密闭送检。
3.应避免标本间交叉污染。
4.标本收集后可立即检测；若不能立即检测，可置于2～8℃冷藏过夜保存；如需长期保存，标本应冻存于-80℃以下，避免反复冻融。
猪流感病毒(通用型)实时荧光定量PCR试剂盒检验方法：
1.试剂准备（试剂准备区）
（1）从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂，充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。
（2）核算当次实验所需要的反应数（n），并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。
n =阴性对照数（1T）+阳性对照数（1T）+误差预留量（1T）+样本数| 单反液配制表(每份) | RT-PCR反应液 | 15.0 μL |
| 逆转录酶 | 2.0 μL |
| Taq酶 | 3.0 μL |
(3)在无菌离心管中加入上述试剂，充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。
2.样本准备（样本处理区）
用QIAGEN、Roche公司RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作按照其试剂盒说明书操作。
3.加样
在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA各5 μl、终体积25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品，终体积为25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。
4. PCR（PCR扩增区）
（1）取样本处理区准备好的PCR反应管，放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置，并记录放置顺序。
（2）按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。| 反应体积 | 25 μL | 通道选择 | FAM通道采集荧光信号 |
PCR
反应
条件 | 步骤 | 条件 | 循环数 |
| 反转录 | 42℃：10分钟（min） | 1 |
| 预变性 | 95℃：3分钟（min） | 1 |
| 预扩增 | 95℃：5秒（s） | 5 |
| 55℃：40秒（s） |
| PCR扩增 | 95℃：5秒（s） |
